Значение и применение бруцеллезной вакцины лечебной. Способ получения вакцины против бруцеллеза

Вакцина бруцеллёзная живая сухая

Инструкция по применению вакцины бруцеллезной живой сухой

Вакцина бруцеллезная представляет собой лиофилизированную культуру живых микробов вакцин штамма В.abortus 19 ВА, имеет вид однородной аморфной массы белого или желтоватого цвета.

Иммунологические свойства

Вакцина бруцеллезная через 20-30 дней после прививки обеспечивает развитие иммунитета продол жительностью 10 12 месяцев, максимальная напряженность иммунитета сохраняется 5-6 месяцев.

Назначение

Профилактика бруцеллеза козье-овечьего типа у взрослых. Прививкам подлежат лица, выполняющие следующие работы:

• по заготовке, хранению, обработке сырья и продуктов животноводства, полученных из хозяйств, где регистрируются заболевания скота бруцеллезом;
• по убою скота, больного бруцеллезом, заготовке и переработке полученных от него мяса и мясопродуктов

Животноводы, ветеринарные работники, зоотехники в хозяйствах, энзоотичных по бруцеллезу. Лица, работающие с живыми культурами возбудителя бруцеллеза.

Прививки следует проводить не позднее, чем за 3-4 недели до начала работы, связанной с риском за ражения.

Способ применения и дозировка

Перед каждой прививкой у вакцинируемого в обязательном порядке определяют наличие специфического иммунитета с помощью одной из серологических или кожно-аллергических реакций. Прививкам подлежат лица с отрицательной реакцией.

Вакцинацию проводят однократно накожно или подкожно. Одна доза при накожном введении составляет 2 капли и содержит 1*10 10 микробных клеток, при подкожном ведении 0,5 мл и содержит 4*10 8 микробных клеток. Ревакцинацию проводят через 10-12 мес. накожно, используя половинную дозу (5*10 9).

Допускается одновременная накожная вакцинация живыми вакцинами против бруцеллеза с прививками против одной из следующих инфекций: ку-риккетсиоза, туляремии и чумы.

Не подлежит применению вакцина, целостность упаковки которой повреждена, с измененными физическими свойствами (посторонние примеси, не растворяющиеся хлопья), с истекшим сроком годности, при нарушении режима хранения.

Вскрытие ампул и процедуру введения препарата осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики. Разведенная вакцина, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 ч. Неиспользованную вакцину уничтожают кипячением в течение 30 мин.

Проведенную прививку регистрируют в установленных учетных формах с указанием наименования препарата, даты прививки, дозы, название предприятия-изготовителя препарата, номера серии, реакции на прививку.

Вакцинация накожным способом

Препарат растворяют 0, 9%-м раствором натрия хлорида для инъекций, который вносят в ампулу стерильным шприцем с иглой из расчета 0, 1 мл (2 капли) на одну прививочную дозу. Ампулу встряхивают до образования равномерной суспензии. Время растворения вакцины не должно превышать 1 мин. Раствори мый препарат не должен содержать осадков или хлопьев. Место прививки, наружную поверхность средней трети плеча, обрабатывают спиртом или смесью спирта с эфиром; применение дезинфицирующих растворов не допускается. После испарения спирта и эфира, не прикасаясь к коже, наносят две капли вакцины на расстоянии 30-40 мм друг от друга, кожу натягивают и стерильным скарификатором проводят через каждую нанесенную каплю вакцины 6 насечек (3 продольных и 3 поперечных) длиной 10 мм каждая с расстоянием между насечками 3 мм. Насечки не должны кровоточить, кровь должна выступать только росинками.

Плоской стороной скарификатора втирают вакцину в насечки в течение 30 сек. и дают подсохнуть 5 мин. При ревакцинации применяют половинную дозу, т. е. 1 кашпо вакцины, через которую делают 6 насечек.

Вакцинация подкожным способом

Прививочная доза препарата при этом способе в 25 раз меньше, чем при накожной вакцинации; раз ведение вакцины производят из расчета 12, 5 мл 0, 9%-го раствора натрия хлорида для инъекций на одну дозу вакцины для накожного применения (подкожная доза 0, 5 мл х 25 = 12, 5 мл). Препарат, содержащийся в ампуле, растворяют так же, как для накожной вакцинации, после чего полученную суспензию переносят в стерильный флакон для инъектора, в который вносят необходимый объем растворителя (например, если в ампуле содержится 7 накожных доз вакцины, то содержимое должно быть суспендированным в 12, 5 мл х 7, т. е. в 87, 5 мл).

Прививки проводят в область наружной поверхности плеча на границе между верхней и средней тре тью. Место введения обрабатывают так же, как и при накожной прививке. Вакцину вводят в объеме 0, 5 мл при режиме работы инъектора, рассчитанном на подкожное введение (согласно Инструкции по применению инъектора БИ-ЗМ и противоинфекционным протектором ППИ-2).

Реакция на введение

Местная и общая реакция на вакцинацию незначительны. Местная реакция при накожной вакцина ции может появиться через 24-48 ч в виде гиперемии, инфильтрата кожи или в виде розово-красных узелков по ходу насечек, иногда сливающихся в валик или образующих небольшую припухлость. При безыгольном методе введения через 12-24 ч на месте инъекции могут появиться гиперемия, инфильтрат диаметром до 25 мм, слабая болезненность. Общая реакция возникает в первые сутки у 1-2% привитых и выражается недомоганием, головной болью, повышением температуры тела до 37, 5-38 °С.

Учитывая возможность развития анафилактического шока у отдельных высокочувствительных лиц, вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин. Места проведе ния прививок должны быть обеспечены средствами противошоковой терапии.

Противопоказания

• Переболевание бруцеллезом. Положительная серологическая или кожно-аллергическая реакция на бруцеллез.
• Острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения - прививки проводят не ранее, чем через 1 мес. после выздоровления (ремиссии).
• Первичные и вторичные иммунодефициты. При лечении стероидами, антиметаболитами, химио- и рентгенотерапии - прививки проводят не ранее, чем через 6 мес. после окончания лечения.
• Системные заболевания соединительной ткани.
• Злокачественные новообразования и злокачественные болезни крови.
• Распространенные рецидивирующие заболевания кожи.
• Аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке в анамнезе).
• Беременность и период лактации.

С целью выявления противопоказаний врач (фельдшер) в день прививки проводит опрос и осмотр прививаемого с обязательной термометрией. При температуре выше 37 °С прививка откладывается. В случае необходимости проводят необходимое лабораторное обследование.

Прививки против бруцеллеза проводят не ранее, чем через 1 мес. после других профилактических прививок или за 1 мес. до них.

Меры предосторожности

Форма выпуска

По 1 мл (4-10 накожных доз) в ампуле. Упаковка содержит 5 ампул. Срок годности - 3 года

Условия хранения и транспортирования

Вакцину хранят и транспортируют в соответствии с СП 3. 3. 2. 028. 95 при температуре не выше 8 °С.

О случаях повышенной реактогенности или развития поствакцинальных осложнений следует сооб щить по телеграфу или телефону с последующим представлением медицинской документации в ГИСК им. Л. А. Тарасевича.

J.07 Вакцины

Из всех бруцеллезных вакцин, применявшихся в производственных условиях в течение ряда послевоенных лет, наиболее эффективной оказалась вакцина из штамма № 19.

Многие другие живые и убитые вакцины (из штамма № 22, 61, 64, 69, вакцина Тронина - Муромцева и др.), предложенные разными авторами, практического значения не приобрели. Главным недостатком этих вакцин было то, что все они в организме прививаемых животных вызывали образование таких же антител, какие возникают у больных бруцеллезом животных. Следовательно, применение этих вакцин яри отсутствии методов дифференциации поствакцинальных антител от естественных вносило путаницу, так как отличать здоровых животных от больных существовавшими в то время диагностическими методами не представлялось возможным.

Преимущество вакцины из штамма № 19 в том, что она более стабильна и менее патогенна по сравнению с другими вакцинами. Применение этой вакцины для прививок телят в значительной мере облегчает дифференциацию больных животных от здоровых.

Вакцина из штамма № 19 является относительно высокоиммуногенным препаратом. Это многократно подтверждено специальными опытами ученых и мировым практическим опытом за многие годы ее применения.

В СССР специальные опыты по изучению иммуногенных свойств вакцины из штамма № 19 проводили О. И. Морякова (1946, 1949), Е. С. Орлов (1952), А. И. Коновалов (1953), М. М. Иванов с сотрудниками (1956), С. А. Вышелесский (1957), Г. В. Божко (1958), Г. А. Коломакин и У. С. Сарсенов (1958), М. К. Юсковец (1960), Е. С. Орлов, П. С. Уласевич и Ю. Ф. Барисевич (1965), И. А. Косилов (1970), П. А. Триленко, Г. А. Объедков и др. (1973) и многие другие.

Кроме того, иммунологическую активность сухой живой вакцины из штамма № 19, изготовляемой в СССР, периодически контролируют ГНКИ и ВИЭВ, что обеспечивает ее стабильность по этому показателю.

Эффективность применения вакцины из штамма № 19 в СССР обобщалась в масштабе страны. За 10-летний период (с 1955 по 1965 г.) практические результаты, по данным А. А. Бойко (1967), следующие.

В СССР ежегодно обрабатывалось этой вакциной до 5 млн. крупного рогатого скота, причем только в хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу. Вакцинировалось до 15 млн. овец. Обрабатывались вакциной телки в 5-8-месячном возрасте. Кроме того, в зонах отгонным животноводством, а в ряде случаев и в других зонах с разрешимы областных и краевых управлений сельского хозяйства допускались прививки коров.

Эффективность применения вакцины в комплексе с другими мероприятиями оказалась не везде одинаковой. В тех республиках, где животные неблагополучных по бруцеллезу стад находились на стойловом содержании, вакцинация их не способствовала быстрейшему искоренению бруцеллеза из-за удлинения срока оздоровления. В республиках же с отгонным животноводством профилактическая вакцинация вакциной из штамма № 19 дала хороший результат.

По мнению А. А. Бойко (1967), в результате широкого применения вакцины из штамма № 19 получен большой экономический эффект. Одним из ее достоинств является то, что вакцинация снижает и предупреждает клиническое проявление болезни.

Л. Л. Вертелецкий (1967) сообщает, что прививки вакциной из штамма № 19 взрослого крупного рогатого скота в неблагополучных и угрожаемых по бруцеллезу хозяйствах в сочетании с комплексом ветеринарно-санитарных и профилактических мероприятий являются эффективной мерой борьбы с бруцеллезом. Вместе с тем он указывает на наличие у вакцины отрицательных свойств, сущность которых состоит в том, что у привитых этой вакциной животных, особенно у взрослых, длительное время (до 2 лет и более) сохраняются поствакцинальные положительные реакции, вследствие чего серологическими исследованиями невозможно отличить здоровых животных, имеющих поствакцинальные реакции, от животных, больных бруцеллезом.

В. С. Орлов (1967) считает, что вакцина из штамма № 19 вызывает у животных иммунитет невысокой напряженности и в связи с этим предохраняет их от заражения лишь небольшими дозами возбудителя. Применение указанной вакцины способствует сокращению абортов и стадах привитых животных, в результате чего создается возможность получения здорового молодняка. К недостаткам вакцины он относит то, что у привитых животных, особенно у взрослых и ревакцинированных, длительное время в крови сохраняются антитела, что мешает исключению у них бруцеллезной инфекции. Испытание многочисленных методов дифференциации поствакцинальных реакций от реакций, наблюдаемых у больных бруцеллезом животных, не дало удовлетворительных результатов.

М. М. Иванов (1967), Е. С. Орлов (1965) и другие исследователи, обобщая результаты опытов, заключили, что иммунитет при бруцеллезе сравнительно небольшой напряженности и непродолжительный. Они считают, что вакцинированные животные могут заболеть бруцеллезом при увеличении заражающей дозы бруцелл. Иммунитет у вакцинированных коров ослабевает уже через 6-8 мес после прививок. У иммунизированных животных бруцеллез может протекать без клинического проявления. Но такие животные являются опасными источниками инфекции.

Применение вакцины из штамма № 19 для вакцинации крупного рогатого скота, неблагополучного по бруцеллезу, было оценено положительно и другими исследователями (М. Е. Аввакумов, 1956, 1957; В. Н. Александров, 3. Ф. Кинева, 1957; А. А. Бойко, 1957; А. В. Масюков, А. И. Полунин, И. И. Грачев, 1958; З. А. Норкина, 1958; Г. А. Объедков, И. В. Васильченко, 1960; А. Ходюков, 1958; М. М. Иванов, 1959 и др.).

Некоторые советские ученые считали целесообразным применять вакцину из штамма № 19 только молодняку (С. А. Вышелесский, 1957; К. Ф. Ламихов, К. П. Ануфриев, Н. А. Агафонов, 1954; Ф. А. Терентьев, Т. Я. Сергеева, И. С. Морозов, Е. А. Олиновский, 1957; Е. И. Буткин, 1957; В. П. Тульчинская и др., 1954; И. Р. Гуревич, 1958).

Применение вакцины из штамма № 19 и тщательное удаление из стад больных взрослых и молодых животных, выделяемых перед прививками и после прививок, по данным некоторых авторов, содействовало ограничению распространения инфекции или облегчало выращивание здорового молодняка (П. Н. Жованик, 1952; М. К. Юсковец, 1955; З. А. Норкина, К. П. Лобанов, В. Г. Карасев, 1959 и др.).

Применение вакцины из штамма № 19 без учета эпизоотического состояния и степени инфицированности вакцинируемого поголовья в ряде случаев приводило к массовым абортам, широкому перезаражению скота. В местах применения вакцины создавалась стационарность бруцеллезной инфекции (Н. Ф. Липский, Н. Ф. Андриенко, 1959; И. В. Ротов, 1959; Р. К. Семенюк, 1961; А. С. Гринин, 1966 и др.).

Многие зарубежные исследователи, например Митчел и Мур (Mitchall а. Moore, 1941), Леро (Lerche, 1947), Михалка (Michalka, 1955), Росси (Rossi, 1956), разделяют мнение о том, что в общем комплексе борьбы с бруцеллезом вакцинация животных вакциной из штамма № 19 является вспомогательным методом, хотя и очень важным, требующим педантичного соблюдения всех ветеринарно-санитарных мер.

Гернхольд (Herrnhold, 1971) сообщает о случае применения вакцины из штамма № 19 в двух сборных стадах, неблагополучных по бруцеллезу. Здесь, как указывает автор, прививали вакциной всех стельных коров со сроком стельности до 5 мес. Коров, абортировавших в предыдущее время, не прививали. Вакцину вводили двукратно с интервалом 4 нед в дозе 30 млрд. живых микробных клеток. Результаты применения вакцины следующие.

В первом стаде (188 голов) в течение 2 лет нормально отелилось 85% коров, 15% коров абортировали; во втором стаде соответственно 78,9 и 21,1%.

Комитет экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ в пятом докладе (1971) дал свои рекомендации по борьбе с бруцеллезом животных. Главное содержание этих рекомендаций приводится ниже.

Основным методом, достигающим искоренения бруцеллезной инфекции в стадах крупного рогатого скота в быстрый срок, считаются метод выделения реагирующих на бруцеллез по серологии и изоляции больных. В этих рекомендациях большие надежды возлагаются на разведывательный метод исследования животных кольцевой реакцией с молоком. При обнаружении подозрительных животных рекомендуется проводить исследование их крови по серологии.

Комитет экспертов считает, что обнаруженные очаги бруцеллезной инфекции при проведении частых исследований крови по серологии могут быть ликвидированы раньше, чем произойдет опасное распространение инфекции.

Животные, которые не могут быть обследованы кольцевой реакцией по молоку, должны обследоваться по крови не реже одного раза в 3 года.

Вакцинация вакцинами из штаммов № 19 и 45/20, как указывается в рекомендациях, может быть применена в зонах с большим распространением инфекции. Причем вакцинация сама по себе не является средством достижения полного искоренения бруцеллеза у крупного рогатого скота, но служит важным шагом в этом направлении.

В стадах с медленным распространением инфекции рекомендуется удаление животных, реагирующих по серологии. В этих стадах вакцинацию телок и взрослых животных, не реагирующих на бруцеллез, указанными выше вакцинами можно проводить, а можно и не проводить. В стадах с сильным распространением инфекции серологические исследования рекомендуется проводить, но реагирующих животных нужно содержать изолированно от нереагирующих (в бруцеллезных изоляторах). В подобных стадах эксперты рекомендуют вакцинировать телок одной из указанных выше вакцин, а нереагирующих взрослых животных можно вакцинировать только в стадах, в которых не было обнаружено реагирующих на бруцеллез (профилактическая вакцинация).

В особо запущенных зонах, где имеется большой процент зараженных животных и удаление их экономически невозможно, Комитет экспертов рекомендует прибегать к вакцинации как телок, так и взрослых животных одной из указанных выше вакцин, причем без проведения диагностических исследований. Количество таких вакцинаций определяется экономическими соображениями. Можно будет прекратить вакцинацию и начать оздоровление стад с помощью методов, дифференцирующих больных от здоровых, как только станет возможным удаление из стада больных бруцеллезом животных.

Комитет экспертов дал характеристику отдельным вакцинам на основе дополнительных научных сведений. Вакцина из штамма № 19 остается наиболее преобладающей в практических условиях для вакцинации крупного рогатого скота.

Вакцина из штамма № 19 при соблюдении принципов сохранения и контроля вакцинных культур и метода ее изготовления должна быть слабопатогенной, иметь относительно высокую иммуногенность, а иногда возникающие после прививки заболевания не должны передаваться от животного к животному. Вакцинный штамм резко снижает свою жизнеспособность при 27°С и очень сильно при 37°С.

Телки, вакцинированные вакциной из штамма № 19 в 3-4-месячном возрасте, при контрольном заражении оказались такими же иммунными, как и телки, привитые в 6-8-месячном возрасте.

При вакцинации телок в 6-8-месячном возрасте вакцина из штамма № 19 может проникать в вымя (преимущественно в одну четверть) от 1,8 до 5,6% привитых телок.

Повторная вакцинация вакциной из штамма № 19 не вносит, по мнению экспертов, значительного изменения в первоначально воссозданный иммунитет, длящийся и без того до 7 лет.

Доза вакцины из штамма № 19 ко времени истечения срока ее годности должна содержать не менее 50 X 10 9 живых микроорганизмов и не более 5% диссоциированных клеток.

У взрослых животных прививки вакциной из штамма № 19 вызывают иммунитет на длительный срок, исчисляющийся годами.

В Англии в 1967 г. введен новый официальный план борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. Основной причиной принятия нового плана является то, что прививки вакциной из штамма № 19 влекут за собой появление у животных антител, не отличающихся от антител, возникающих у больных бруцеллезом животных. Этим планом предусматривается применение в некоторых зонах слабоагглютиногенной убитой вакцины из штамма 45/20. Применение вакцины из штамма № 19 рекомендуется только для телят в возрасте с 91-го по 180-й день.

Указывается, что вакцина-из штамма № 19 непригодна для применения в следующих случаях:

1) когда стада благополучны или неизвестны по эпизоотической ситуации, а соседние стада сильно поражены бруцеллезом;

2) когда нет данных о предыдущих прививках телок;

3) когда стадо считается слабоинфицированным. Непригодна она и для уменьшения абортов в неблагополучном стаде.

Именно для всех этих случаев допущена убитая адъювант-вакцина из штамма 45/20, выпускаемая промышленностью Англии.

Оценку этому новому плану искоренения бруцеллеза в Англии дает за 1,5 года Браун (Brown, 1969). По приближенным данным, из около 1 млн. неблагополучного по бруцеллезу крупного рогатого скота 33 000 оказались достоверно благополучными (из 12 858 стад - 3222 стада). Автор считает, что значительная часть неудачи оздоровления может быть отнесена на счет предыдущей вакцинации скота вакциной из штамма № 19. Его критическое отношение к MRT (кольцевая проба цельного молока) заключается в том, что этот метод диагностики менее чувствителен по сравнению с официальными серологическими методами и, кроме того, MRT показывает довольно часто неспецифические результаты, не подтверждающиеся бактериологическим исследованием и серологическими реакциями.

Сомнительные показания MRT только в 30% случаев можно отнести к достоверным. Остальные 70% бывают у коров, болеющих маститами, а также у новотельных и находящихся в запуске. Тем не менее, автор положительно расценивает общий результат, полученный в стране за указанный срок применения новой схемы борьбы.

Мельдрум (Meldrum, 1970) сообщает о том, что в США в штате Тасмания были получены хорошие результаты при оздоровлении стад крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма № 19. Реагирующих на бруцеллез животных убивали.

В США борьба с бруцеллезом сельскохозяйственных животных основывается на выявлении реагирующих на бруцеллез животных и их убое (lest and langhter metod). Молодняк 4-6-месячного возраста прививают вакциной из штамма № 19. По данным Буша и Паркера, в США в 1934 г. было 11,5% зараженного бруцеллезом крупного рогатого скота, в 1950 г. - 3,5% и в 1969 г. - 1,1% (из 10 млн. поголовья). Соответственно снизились экономические потери, которые были огромными. Так, только от недобора мошка, телят, затрат на обслуживание в 1947 г. они составляли 50 млн. долларов, а в 1961 г. - только 25 млн. долларов.

Мероприятия по искоренению бруцеллеза проводились в зависимости от степени развития инфекции.

1. В свободных от бруцеллеза областях (Certified Brucellosis Free-Areas) производили серологические исследования и срочный убой тех реагирующих на бруцеллез животных.

2. В областях с колеблющимся эпизоотическим состоянием (Modified-Certified Brucellosis Areas), например, где заражено не более 50% всех стад и имеется не более 1% крупного рогатого скота, больного бруцеллезом, помимо серологических исследований применяли молочно-кольцевую пробу.

3. В условно-свободных от бруцеллеза областях (Validated Brucellosis Free-Areas), где допускается зараженность не более 1% стад или не более 0,2% всего поголовья животных, причем не должно ими выявлено источника (очага) бруцеллеза крупного рогатого скота к данной области в момент обследования, применяли те же методы исследования, что и в пункте 2, но проводили эти исследования несколько чаще.

В Италии, по данным Нарделли (Nardelli, 1970), существует 3 метода борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. Первый из них разработан для районов с наименьшим уровнем распространения инфекции. Здесь убивают скот, реагирующий на бруцеллез по РА, РСК и кольцевой пробе, а также при обнаружении бруцелл в последе и проводят строгие санитарно-гигиенические мероприятия.

Второй метод состоит в вакцинации телок вакциной из штамма №19 в 4-6-месячном возрасте и применении того же комплекса, но и при первом методе. Этот метод применяется в районах с относительно высоким уровнем распространения бруцеллезной инфекции.

Третий метод принципиально отличается от предыдущих тем, что здесь проводят вакцинацию телок в указанном возрасте без вывода из стада больного скота. Цель этого метода - достигнуть снижения степени пораженности скота инфекцией.

Как видно из приведенного, вакцинация взрослого крупного рогатого скота с профилактической целью в благополучных по бруцеллезу стадах не рекомендуется. В неблагополучных стадах рекомендуется прививать только телок в 6-12-месячном возрасте.

Ранее, в 1952 г., Международное эпизоотическое бюро (МЭБ) рекомендовало 2 основных метода истребления бруцеллеза: 1) убой и изоляцию бруцеллезных животных в соответствии с результатами исследования крови и молока при помощи стандартизированных методов; 2) иммунизацию при помощи соответствующих вакцин. При этом вакцина из штамма № 19 или другая аналогичная вакцина рекомендовалась для вакцинации телок в 4-8-месячном возрасте, чтобы не осложнять оценку диагностических проб. Вакцинация взрослых животных допускалась лишь в сильно пораженных хозяйствах.

Таким образом, при анализе данных отечественных и зарубежных исследований выясняется, что вакцина из штамма № 19 не может быть применена для прививок здорового скота с профилактической целью. В очагах инфекции, где прививки вакциной из штамма № 19 до некоторой степени сдерживают клиническое проявление бруцеллеза, применение ее небезопасно ввиду невозможности в дальнейшем дифференцировать больных животных от здоровых.

Вконтакте

Использование: биотехнология, вакцина, профилактика бруцеллеза. Сущность изобретения: вакцину получают путем конъюгации белковых антигенов, выделенных из вакцинного штамма Br.abortus 19 с целлюлозной матрицей в присутствии треххлористого хрома. Изобретение позволяет получить при биологической безопасности производства вакцину против бруцеллеза, создающую длительный протективный иммунитет. 4 табл.

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики бруцеллеза. Известен способ получения вакцины против бруцеллеза, включающий культивирование штамма Brucella abortus 19 на плотной питательной среде с последующим смывом бактериальной массы, лиофильным высушиванием микробных клеток. Однако вакцина, полученная известным способом, имеет следующие недостатки: является живой, в результате чего развивается бактерионосительство; экологически небезопасна в связи с возможностью реверсий штамма; абортогенна; вызывает образованные антител в высоких титрах, что создает трудности при диагностике бруцеллеза. Известен также способ получения вакцины против бруцеллеза, включающий культивирование штамма Brucella abottus 54 с последующей экстракцией антигена бруцелл, очищением на колонках с сефадексом G75, конъюгированием с водорастворимыми производными диальдегиддекстрана, модифицированными грамицидином, с использованием для конъюгации карбодиимида и дополнительной очистки полученного конъюгата. Получают в результате иммуногенную вакцину, защищающую до 89% животных, зараженных вирулентными штаммами бруцелл, и не вызывающую образования антител. Однако этот способ имеет следующие недостатки: вакцина, полученная известным способом, обладает недостаточно длительными протективными свойствами; используемый штамм Brucella abortus 54 является высоко вирулентным, что создает высокую биологическую опасность при производстве вакцины; способ получения вакцины представляет собой сложный многоэтапный процесс. Целью изобретения является создание длительного протективного иммунитета, биологической безопасности производства вакцины и упрощение способа. Это достигается использованием в качестве носителя целлюлозной матрицы и ее конъюгации в присутствии треххлористого хрома с белками антигена, приготовленного из вакцинного штамма бруцелл. П р и м е р 1. Целлюлозную матрицу готовят по методу Лехтцинд Е.В. и Гурвича А. Е. 1981. Для этого хлопковую вату растворяют в медно-аммиачном комплексе (реактив Швейцера) и добавляют серную кислоту, в результате чего целлюлоза выпадает в виде мелкодисперсной взвеси. Растворимый бруцеллезный антиген получают по методу Kaneene et al, 1978, для чего смывают с матрасов двухсуточную культуру вакционного штамма Brucella abortus 19, 50 г сырой массы бруцелл ресуспендируют в 200 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 2 ч, смесь автоклавируют 20 мин при 121 о С и после охлаждения центрифугируют при 12 тыс. об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость очищают на колонке с сефелексом G25 в физиологическом растворе. Белковый пик, выходящий в объеме колонки, собирают и смешивают с целлюлозной матрицей в соотношении 100 мг белка на 1 г целлюлозы при одновременном добавлении 25 мМ раствора CrCl 3 . Оставляют на магнитной мешалке на холоду на 1-3 сут. Отмывают физиологическим раствором. Определяют присоединившийся белок по окрашиванию бромфеноловым синим. Полученная белково-целлюлозная вакцина (БЦВ) представляет собой мелкодисперсную водную суспензию белого цвета. П р и м е р 2. Для изучения клеточного иммунитета, индуцированного вакциной, определяют реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Мышам BaLb/c подкожно вводят разные дозы вакцины однократно или трехкратно с недельным интервалом. В контроле используют мышей того же привоза, не вакцинированных БЦВ. Через месяц животным вводят в правую лапку разрешающую дозу растворимого антигена (10 мкг белка в 50 мкл физиологического раствора), а в левую лапку 50 мкл физиологического раствора. Уровень ГЗТ оценивают через 24 ч по разнице между толщиной опытной и контрольной лапки. Полученные результаты, представленные в табл. 1, показывают, что БЦВ при всех использованных дозах и режимах ее введения, индуцирует достоверную реакцию ГЗТ. П р и м е р 3.Для исследования протективных свойств БЦВ в сравнении с исходным растворимым антигеном, а также для изучения неспецифического действия на эти свойства целлюлозной матрицы беспородным белым мышам подкожно вводили разные дозы БЦВ. В контроле мышам вводили исходный растворимый антиген бруцелл в тех же дозах или целлюлозную матрицу без антигена. Через месяц после инъекции мышам внутрибрюшинно вводили 10 3 микробных клеток бруцелл вирулентного штамма 54. Через 1 месяц после заражения проводили бактериологические и серологические исследования. При бактериологических исследованиях делали посев из органов мыши на пробирки со скошенным мясопептонным печеночным глюкозоглицериновым агаром. Через месяц проводили окончательный учет посевов и расчет индекса инфицированности по формуле ИИ где а количество выделенных культур; Ь количество исследованных органов. Кроме индекса инфицированности (ИИ) одновременно определяли количество микробных клеток на селезенку (селезеночное число) с помощью бактериологических посевов 10-крытных разведений гомогената селезенки. Уровень антителообразования в момент забоя животных определяли реакцией непрямой гемагглютинации. Из данных, приведенных в табл. 2, следует, что БЦВ вызывает снижение индекса инфицированности во всех случаях по сравнению с соответствующей дозой исходного антигена и контролем заражения. Дозы антигена в 25 и 50 мкг белка достоверно (Р < <0,05) снижают накопление бруцелл в селезенках мышей с 7,70,65 lg м.к. (микробных клеток) в контрольной группе до 4,70,99 lg м.к. в группе с 50 мкг белка антигена и до 5,00,68 lg м.к. в группе, получившей 25 мкг белка. Конъюгация на целлюлозной матрице усиливает этот эффект антигена, достоверность различий показателя селезеночного числа между группами мышей с 25 и 50 мкг белка в БЦВ и контролем заражения возрастает (Р < <0,01). Целлюлозная матрица сама по себе не оказывает защитного эффекта против бруцеллеза. У зараженных мышей, вакцинированных БЦВ, уровень антителообразования был минимальным. П р и м е р 4. Для исследования протективного эффекта БЦВ в сравнении с живой вакциной в динамике мышей BaLb/c иммунизировали 50 мкг БЦВ, а в контроле 10 4 м.к. вакцинного штамма 19. Через 1 и 2 месяца после введения вакцин мышей заражали внутрибрюшинно бруцеллами вирулентного штамма 54 в дозе 10 3 м. к. Через месяц после заражения проводили бактериологические исследования. Учет осуществляли также, как в примере 3. Из данных, представленных в табл. 3, следует, что протективный эффект БЦВ через 1 месяц после вакцинации сравним с таковым для живой вакцины, а через 2 месяца после вакцинации высоко достоверно (P < 0,001) превышает защитный эффект живой вакцины, оцениваемый по селезеночному числу. Таким образом, использование целлюлозного носителя в БЦВ позволяет не только индуцировать выраженный протективный эффект против бруцеллеза, но и создавать депо иммобилизованного антигена, в результате чего защитные свойства БЦВ возрастают со временем. П р и м е р 5. Протективный эффект БЦВ был исследован также у морских свинок, которым подкожно однократно вводили 125 мкг БЦВ. Контрольным животным вводили 10 9 м.к. живой вакцины штамма 19. Через 1 месяц после вакцинации животных заражали 10 2 м.к. бруцелл вирулентного штамма 54. Кровь забирали в динамике через 2 недели, 1,2, 3 месяца и исследовали в реакциях агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК) и непрямой гемагглютинации (РНГА). Бактериологические исследования проводили, как в примере 3. Данные табл. 4 показывают, что число зараженных животных, индекс инфицированности и селезеночное число у морских свинок, вакцинированных БЦВ, несколько ниже, чем у вакцинированных живой вакциной. В опытных группах животных титры антител не превышали 1:25 в РА, 1:10 в РСК и 1:20 в РНГА, тогда как в контрольных группах титры антител составляли в среднем 1:100 в РА, более чем 1:40 в РСК и 1:320 в РНГА. Эти данные показывают, что иммунизация морских свинок БЦВ по сравнению с живой вакциной из штамма 19 вызывает значительно сниженный уровень антителообразования и индуцирует сравнимый протективный эффект. Таким образом, из примеров 2-5 следует, что БЦВ, приготовленная простым методом соединения белковой части водорастворимого антигена бруцелл вакционного штамма 19 с биологически инертным целлюлозным носителем, индуцирует выраженную реакцию клеточного иммунитета, но слабое антителообразование, и стимулирует развитие протективного иммунитета, напряженность которого возрастает со временем.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА, включающий культивирование бруцелл с последующим выделением антигена и его конъюгацией с носителем, отличающийся тем, что для культивирования используют штамм Brucella abortus 19, антиген получают водной экстракцией, в качестве носителя используют целлюлозную матрицу, а конъюгацию антигена с носителем проводят при их соотношении 1: 10 (по массе) в присутствии 25 мМ раствора треххлористого хрома.

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения вакцин против колибактериоза молодняка с/х животных, и может найти широкое применение на предприятиях биологической промышленности при производстве вакцинных препаратов для профилактики колибактериоза

Изобретение относится к микробиологии и может использоваться как штамм-продуцент специфических бруцеллезных R-антигенов, необходимых для получения кроличьей диагностической сыворотки к бруцеллам в R-форме, а также как антиген для конструирования R-эритроцитарного диагностикума