Тельца гейнца анализ. Анемия у животных

К структурным изменениям эритроцитов можно отнести изменение их численности, размеров, формы, цвета, появление в них включений или микроорганизмов. Вообще структурные изменения эритроцитов у кошек аналогичны таким изменениям у других видов животных. Однако у кошек бывают некоторые только им свойственные изменения эритроцитов, требующие особого внимания в отношении постановки диагноза и выбора лечения (см. предыдущую статью). Эти изменения включают анемию с тельцами Хайнца (вызываемую лекарственными препаратами, питанием и заболеваниями), пойкилоцитоз (вызываемый заболеваниями печени и введением доксорубицина) и макроцитарную анемию (вызываемую вирусом лейкемии кошек).

Анемия с тельцами хайнца

Патофизиология образования телец Хайнца у кошек
Тельца Хайнца представляют собой скопления осадка гемоглобина внутри эритроцитов, что ведет к окислительному повреждению. Окисление (окислительная нагрузка) вызывается увеличением образования (или уменьшением детоксификации) высокореактивных химических соединений, называемых свободными радикалами, которые взаимодействуют и разрушают окружающие составные части клеток. Свободные радикалы могут самопроизвольно образоваться из кислорода (который находится в высокой концентрации внутри эритроцитов) или могут появиться в результате действия лекарств, химических веществ или растений с окисляющими свойствами. Окисление гемоглобина может привести к образованию метемоглобина или телец Хайнца. Тельца Хайнца разрушают эритроциты и могут способствовать анемии. У кошек тельца Хайнца ранее назывались «невосприимчивыми тельцами эритроцитов» (ER), или тельцами Шмауча; они являются важной чертой эритроцитов всех членов семейства кошачьих.

Гемоглобин у кошек особенно чувствителен к окислению, потому что он содержит большое количество групп свободного тиола (SH), которые являются целью для окислительного повреждения. Окисление тиола вызывает реконфигурацию цепей глобина и их конечную денатурацию в тельца Хайнца. Димеры гемоглобина у кошек также разлагаются с большей готовностью, чем у других видов, и глютатион, защитник тиола, является неустойчивым и легко истощается в эритроцитах кошек. В конечном итоге тельца Хайнца образуются в эритроцитах кошек в связи с применением препаратов, кормлением и заболеваниями. Поскольку структура глобина тесно связана с окислением гема, метемоглобинемия часто сопровождает образование телец Хайнца или предшествует ему.

Тельца Хайнца также наиболее вероятны у кошек из-за несинусоидальной структуры селезенки. В отличие от собак, у кошек имеются относительно большие селезеночные отверстия, которые обеспечивают свободное прохождение эритроцитов даже при наличии жестких включений, таких как тельца Хайнца. Поэтому селезенка у кошек не оказывает влияния на скорость удаления эритроцитов, содержащих тельца Хайнца, из системы кровообращения. Сами по себе тельца Хайнца сокращают срок жизни эритроцитов, но степень анемии, возникающей как следствие этого, при наличии последней зависит от быстроты образования телец Хайнца, их размеров и численности, а также степени повреждения мембраны эритроцитов.

Причины появления телец Хайнца у кошек Тельца Хайнца, вызванные лекарственными препаратами
Препараты-оксиданты, вызывающие образование телец Хайнца, включают ацетаминофен (тиленол; парацетамол), фенацетин, феназопиридин, метиленовый синий и DL-метионин. Все эти препараты способны вызывать сопутствующую метемоглобинемию без образования телец Хайнца. Препараты-оксиданты с большей вероятностью вызывают гемолитическую анемию с тельцами Хайнца, чем другие причины образования телец Хайнца, из-за быстроты их образования и вероятности дополнительного окислительного повреждения мембраны эритроцитов. Ацетаминофен наиболее часто служит причиной анемии с тельцами Хайнца у кошек из-за неспособности кошек детоксифицировать данный препарат при помощи глюкоронидации. Токсичность ацетаминофена зависит от дозы, и одной таблетки весом 325 мг достаточно для токсичности. Вообще препараты-оксиданты вызывают токсичность у кошек в меньших дозах, чем это требуется для других видов животных. Часто бывает необходим подробный опрос клиента для постановки диагноза токсичности препарата.

Образование телец Хайнца вследствие особого кормления
Продукты питания, вызывающие появление телец Хайнца, включают лук, пропиленгликоль (пищевая добавка) и некоторые рыбные корма. При появлении телец Хайнца на фоне особого кормления может быть нормальный гематокрит и анемия от слабой до умеренной. Скорость и степень образования телец Хайнца связаны с приемом пищи и количеством поступившего оксиданта. При малых количествах оксиданта костный мозг имеет достаточно времени для компенсации укороченного срока жизни RBC. Кошки, получающие оксиданты с кормами, больше подвержены действию препаратов-оксидантов. Например, ацетаминофен более токсичен для кошек, получающих корма, содержащие пропиленгликоль.

Лук (сырой, приготовленный, дегидрированный или в виде порошка) вызывает образование телец Хайнца в зависимости от его количества; при его избытке может развиться гемолитическая анемия. Некоторые коммерческие мясные продукты для детского питания (например, фирмы «Гербер») содержат достаточно лукового порошка, что является причиной образования более чем 50% телец Хайнца и в некоторых случаях ведет к анемии, в зависимости от приема пищи. Детского питания с луковым порошком не следует давать кошкам с диабетом или другими заболеваниями, при которых и так имеется повышенное содержание телец Хайнца и могут возникнуть нарушения. В некоторых продуктах для кошек содержится микроскопическое количество лукового порошка или соли, что едва ли способно вызвать повышенное образование телец Хайнца Один или более компонентов тиола, содержащихся в луке, отвечают за окисление гемоглобина.

До недавних пор пропиленгликоль добавлялся в полувлажные корма для кошек в качестве источника углеводов и консерванта. В настоящее время в корма для кошек больше не добавляют пропиленгликоль, поскольку он вызывает появление телец Хайнца; однако корма для собак все еще содержат эту пищевую добавку. В некоторых кормах для кошек есть пропиленгликоль, но его количество, поступающее с пищей, очень мало и едва ли способно вызвать образование телец Хайнца. Механизм, по которому пропиленгликоль вызывает окисление, неизвестен; это зависит от дозировки. Высокие дозы вызывают слабую или умеренную анемию. Рыбные корма также вызывают появление телец Хайнца и способны вызвать анемию, особенно у котят. Специфические компоненты рыбы, ответственные за образование телец Хайнца, еще не изучены.

Звболевания, приводящие к образованию телец Хвйнца
У кошек некоторые заболевания вызывают увеличение телец Хайнца, в особенности диабетический кетоацидоз. Кошки с кетоацидозом (в том числе те, у которых кетоацидоз не зависит от диабета) могут иметь 78-80% больших телец Хайнца, а у большинства их более 30%. У кошек, больных диабетом, не сопровождающимся кетонозом, также образуется повышенное число телец Хайнца, но в меньшей степени (от 5 до 20%). Механизм образования телец Хайнца, вызванных диабетом, неизвестен. Количество телец Хайнца соответствует концентрации кетонов в крови, потому вероятна какая-либо связь с кетозом.

Гипертиреоз и неоплазия, особенно лимфома, также связывают с повышением числа телец Хайнца, хотя в этих случаях тельца Хайнца обычно меньших размеров и их меньше, чем у кошек с диабетом. Диабет, гипертиреоз и неоплазия приводят к усилению кетогенеза, глюконеогенеза и катаболизма протеинов, согласно общему механизму увеличения окислительной нагрузки. Заболевания печени, почек, урологические заболевания, заболевания верхних дыхательных путей, стоматит, фарингит и кишечные нарушения также могут вызывать у некоторых кошек увеличение телец Хайнца. Гипофосфатемию также связывают с тельцами Хайнца у кошек, но неясно, является ли данное заболевание главной причиной окисления гемоглобина или просто сопутствующим фактором при определенных болезненных состояниях, таких как кетоацидотический диабет.

Вызванные болезнью тельца Хайнца часто приводят к слабой или умеренной, иногда тяжелой анемии по причине их большого размера и количества и из-за того, что главное заболевание часто дополнительно становится причиной эритропоэза. Острый гемолиз обычно не наблюдается, поскольку образование телец Хайнца, вызванных заболеваниями, обычно меньше, чем количество телец Хайнца, вызванных лекарственными препаратами.

Кошки с тельцами Хайнца, вызванными заболеваниями, также больше подвержены другим оксидантам. Например, у кошек с диабетом или гипертиреозом, которых кормили детским питанием с луковым порошком, бывает больше телец Хайнца, чем ожидалось по отдельности от употребления лука или только заболевания.

Диагноз анемии с тельцами Хайнца Количественное определение телец Хвйнца
Кошкам с анемией необходимо проводить исследование на наличие телец Хайнца. Аналогичным образом, кошкам с тельцами Хайнца, замеченными в мазках крови, следует всегда делать анализ на наличие анемии. Кроме того, всем кошкам с кетозом (обнаруженным по моче) надо проводить исследование на наличие телец Хайнца. Количество телец Хайнца подсчитывается как процент, взятый от 1000 эритроцитов с использованием нового метиленового синего красителя. Быстрый анализ телец Хайнца и ретикулоцитов можно произвести, поместив каплю нового метиленового синего на высушенный мазок крови и накрыв его покровным стеклом. Иногда тельца Хайнца можно наблюдать в виде бледных включений в мазках, окрашенных по Райту-Джемсу, особенно если они достаточно большие для того, чтобы выступать из эритроцитов периферии. Некоторые эритроциты, возможно, выталкивают тельца Хайнца. Тельца Хайнца могут также привести к образованию «теней эритроцитов», которые возникают при частичном лизисе эритроцитов и выходе гемоглобина. «Тени эритроцитов» появляются в виде краев полостей эритроцитов с присоединенным тельцем Хайнца. В отличие от собак, тельца Хайнца у кошек обычно единичны, бывают одного размера и могут становиться очень большими (занимают одну треть клеточного объема). Препараты-оксиданты могут вызывать многочисленные тельца Хайнца. Многие большие тельца Хайнца могут искусственно увеличивать среднюю концентрацию гемоглобина в клетках (МСНС) и общую численность лейкоцитов, измеряемую с помощью автоматических цитометров; на гистограммах лейкоцитов наблюдаются двойные пики или левые выступы.
Мнение, что у кошек тельца Хайнца - вполне «нормальное» явление, вытекает из недостатка понимания причин и назначений телец Хайнца у данного вида животных. По-настоящему здоровые кошки имеют менее 5% телец Хайнца, а кошки, получающие строго регламентированное питание, имеют менее 1-2%. Несмотря на отсутствие телец Хайнца у новорожденных котят, их наличие никак не зависит от возраста, пола или породы. Кошек, имеющих более 10% телец Хайнца и не подвергавшихся действию лекарственных препаратов, надо исследовать на наличие диабета, кетоацидоза или реакции на лук.

Метгемоглобинемия и анемия
Препараты-оксиданты почти всегда приводят к гемолитической анемии с тельцами Хайнца, которая бывает от слабой до тяжелой и часто сопровождается метгемоглобинемией. Кошки с токсичностью, вызванной ацетаминофеном, издают различные звуки, у них обычно наблюдаются угнетение, гиперсаливация, отек в области морды, рвота, гипервентиляция, желтуха и цианоз (вследствие метгемоглобинемии). Иногда возникает гемоглобинурия. Анализ метгемоглобинемии легко производится при помощи «капельного теста» (когда содержание метгемоглобина равняется 15% и более, капля крови на белой промокательной бумаге будет казаться коричневой по сравнению с каплей нормальной крови) или при помощи лабораторного подсчета концентрации метгемоглобина. Тельца Хайнца, вызванные кормлением и заболеваниями, обычно не приводят к метгемоглобинемии.

Тельца Хайнца, появившиеся по указанной причине, могут вызывать анемию, в зависимости от их размеров и количества и скорости образования. У кошек, у которых тельца Хайнца вызваны заболеваниями, чаще возникает анемия (особенно у кошек с кетоацидотическим диабетом), чем у кошек с теми же заболеваниями, но без телец Хайнца. Чем больше количество и размеры телец Хайнца, тем больше вероятность анемии. Однако бывает и так, что у кошек имеется 100% телец Хайнца и нормальный гематокрит, особенно если тельца Хайнца небольших размеров или скорость их образования (и укорочение срока жизни эритроцитов) достаточно медленные для того, чтобы костный мозг компенсировал их образование. Несмотря на то, что тельца Хайнца обычно образуются гораздо медленнее по причине питания или заболеваний, чем от приема препаратов, они могут достигать в этих случаях гораздо больших размеров. Анемия наиболее вероятна, когда тельца Хайнца больших размеров и поражают более 30% эритроцитов. Бывает трудно отличить влияние телец Хайнца на гематокрит от влияния на него основного заболевания.

У всех кошек с тельцами Хайнца следует произвести подсчет ретикулоцитов для оценки регенеративной реакции. Гемолитическая анемия с тельцами Хайнца, вызванная приемом препаратов, часто сопровождается ретикулоцитозом, в то время как увеличение численности пунктированных ретикулоцитов подтверждает наличие слабого или хронического гемолиза. Не следует исключать и другие случаи анемии, даже при наличии телец Хайнца. У кошек, больных диабетом, например, следует измерить содержание фосфора в сыворотке крови, чтобы отличить гемолиз, вызванный гипофосфатемией, от анемии с тельцами Хайнца. При токсичности, вызванной ацетаминофеном, необходимо также сделать анализ ферментов печени, поскольку у некоторых кошек развивается внезапная печеночная недостаточность, которая может привести к смерти.

Лечение анемии с тельцами Хайнца
Лечение анемии с тельцами Хайнца, вызванной лекарственными препаратами, является антидотным и поддерживающим. Во-первых, должен быть определен и удален источник оксиданта. Во-вторых, поддерживающий уход должен способствовать необходимой перфузии тканей. При чрезмерно низком гематокрите (< 12%) может потребоваться гемотрансфузия, но надо соблюдать осторожность, чтобы у кошки не было стресса. Часто бывает достаточно кислородного лечения и тихой темной клетки, в которой кошка чувствовала бы себя спокойно и не испытывала стрессов. В-третьих, антиоксидантное лечение направлено на восстановление истощенного глютатиона и особенно помогает в случаях токсичности, вызванной ацетаминофеном. Лечение N-ацетилцистеином (мукомист или мукоцил) дает хорошие результаты, ускоряя очищение от ацетаминофена наряду с восполнением групп тиола. N-ацетилцистеин выпускается в виде 10%-ного или 20%-ного раствора. Его нужно вводить вначале в дозе 140 мг/кг п/о или в/в, а затем 70 мг/кг через каждые 4 часа в течение 3-5 дополнительных сеансов лечения. Также эффективен сульфат натрия (1,6%-ный раствор) в дозе 50 мг/кг в/в через каждые 4 часа. Некоторым кошкам (особенно самкам) помогает лечение метиленовым синим для полного прекращения метгемоглобинемии. Вопреки бытующему мнению, метиленовый синий можно с безопасностью применять для кошек в том случае, если он вводится только один раз (1,0-1,5 мг/кг в/в); дополнительные дозы могут ускорить образование телец Хайнца. Для лечения метгемоглобинемии также рекомендуется аскорбиновая кислота. Но эритроцитов у кошек воспринимают ее настолько медленно, что она имеет, вероятно, лишь ограниченную пользу.

Возможно, что N-ацетилцистеин, аскорбиновая кислота и витамин Е могут помочь кошкам при анемии с тельцами Хайнца, образование которых вызвано питанием или заболеваниями, но не проводилось никаких исследований по испытанию их эффективности. Наиболее важно установить и устранить раздражающий пищевой компонент или лечить основное заболевание и обеспечить требуемый поддерживающий уход. После ликвидации окисляющего фактора тельца Хайнца, как правило, постепенно исчезают в течение 1-4 недель. Кошек надо тщательно исследовать на развитие анемии, возникающей при быстром удалении эритроцитов из-за больших размеров и/или большого количества телец Хайнца. Всех кошек с анемией с тельцами Хайнца надо исследовать при помощи последующего гематокрита, ретикулоцитов, и численность телец Хайнца документально отражает исчезновение телец Хайнца и регенерацию эритроцитов.

Пойкилоцитоз

Нарушения формы эритроцитов (пойкилоциты) гораздо менее распространены у кошек, чем у собак, в частности, из-за малого размера эритроцитов кошек. По этой причине пойкилоциты являются более специфическими индикаторами заболевания или лекарственной терапии у кошек и могут обеспечить полезную диагностическую и прогнозическую информацию.

Пойкилоцитоз при заболеваниях печени
Более чем у 50% кошек с заболеваниями печени развивается пойкилоцитоз, который характеризуется главным образом акантоцитами и овалоцитами (эллиптоцитами). Также могут наблюдаться небольшие количества кератоцитов, шизоцитов и пузырьковидных клеток. В то время как эти морфологические изменения часто имеют место у собак с заболеваниями печени, редкость пойкилоцитоза у кошек делает полученные данные очень важными для диагностики и прогноза. Пойкилоцитоз продолжается или усиливается у кошек с усилением заболеваний печени и уменьшается при регрессии заболевания и нормализации других лабораторных данных.

У кошек с гепатическим липидозом с гораздо большей вероятностью разовьется пойкилоцитоз, чем у кошек с другими видами заболеваний печени. Кроме того, у кошек с умеренным (2+) или заметным (4+) пойкилоцитозом более вероятно наличие анемии, с гематокритом в среднем менее чем на 5%, чем у кошек с заболеваниями печени, но без пойкилоцитоза. Пойкилоцитоз при заболеваниях печени, по всей вероятности, связан с изменением липидов в мембранах эритроцитов и более заметен у кошек с повышенным уровнем холестерина. Другие возможные механизмы включают увеличение окислительного повреждения, возникающего в результате дефицита витамина Е (в результате нарушения всасывания из-за холестаза) и микроангиопатии. Количество телец Хайнца иногда увеличивается при заболеваниях печени, но наиболее часто они наблюдаются при липидозе, возникшем в результате сахарного диабета.

Пойкилоцитоз, вызванный лечением доксорубицином
Введение доксорубицина вызывает пойкилоцитоз, аналогичный тому, который наблюдается при заболеваниях печени, со смешением овалоцитов, эхиноцитов, кератоцитов, акантоцитов, шизоцитов и пузырьковидных клеток. Степень пойкилоцитоза увеличивается от слабой (1+) до заметной (4+) с последующим лечением данным препаратом. Тяжесть пойкилоцитоза, вызванного доксорубицином, значительно выше у кошек, чем у собак, и у кошек число пойкилоцитов заметно увеличивается после всего лишь одного сеанса лечения данным препаратом. Такое действие после одного сеанса может быть вызвано в некоторой степени оксидантной чувствительностью эритроцитов кошек. У кошек, которых лечили доксорубицином, обычно не развивается анемия.

Макроцитная анемия

Макроцитная анемия часто наблюдается у кошек, пораженных вирусом лейкемии кошек (ВЛК), при этом средний объем клеток составляет более 50 fl. Хотя макроцитная анемия может также вызываться ретикулоцитозом (вследствие большего размера незрелых эритроцитов), в данном случае это, очевидно, бывает результатом нарушения выработки эритроцитов, и полихромазия не наблюдается. Средний объем эритроцитов (MCV), больший, чем 55 flпри отсутствии полихромазии, является хорошим положительным показателем наличия ВЛК-инфекции. Увеличение MCV, обычно без анемии, наблюдается у некоторых кошек с гипертиреозом.

Следует учитывать, что проба не является специфичной при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогенгазы, поскольку эти тельца могут появляться при передозировке сульфаниламидов и отравлении анилиновыми красителями, а также дефиците других ферментов (глутатион-редуктазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы). 1. Следует объяснить пациенту, что исследование позволит выявить причину анемии.

Референтные пределы - Отрицательные. Тельца Гейнца не обнаруживаются в нормальной крови за исключением небольшого количества клеток у некоторых новорожденных или больных после спленэктомии.
1. Недостаточное наполнение пробирки, неправильный выбор антикоагулянта, недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом или поздняя отправка крови в лабораторию.
2. Переливание крови незадолго до исследования.
3. Интерференция:
Повышение:
Окисляющие препараты в достаточной дозе могут вызывать образование телец Гейнца и гемолиз у здоровых людей. В их число входят: аминосалициловая кислота, анилин, хлораты, дапсон, гидроксиламин, нафталан, нитробензен, нитрофурантоин, фенацетин, производные фенола, фенилгидразин, фенилсемикарбазид, резорцин, салицилазосульфидин, сульфоксон натрия, сульфаметоксипиридин, сульфаниламиды, сульфоны.

Установление причин гемолитическойанемии.
Увеличение содержания:
При дефиците Г-6 - ФДГ и других ферментов гексозомонофосфатного шунта образование телец Гейнца и гемолиз могут вызывать низкие дозы окисляющих препаратов.
Заболевания с нестабильным Hb (врожденная анемия с тельцами Гейнца), после спленэктомии или при применении окисляющих препаратов.
Гомозиготная β- талассемия.

Тельца Гейнца - анализ крови , направленный на обнаружение в мазке крови специфических телец, которые могут появиться при наследственном дефиците фермента глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Прием некоторых препаратов (сульфаниламидов) в сочетании с инфекциями, нарушением функции печени, почек при дефиците этого фермента может приводить к гемолизу (распаду) эритроцитов. Применяется для диагностики анемий.

Тельца Гейнца — это накапливающиеся на мембране эритроцита частицы нерастворимого Hb, выпавшего в осадок из цитоплазмы. Несмотря на то что тельца Гейнца удаляются из эритроцитов в селезенке, они нередко служат причиной гемолитической анемии. Тельца Гейнца можно обнаружить в цельной крови при помощи фазово-контрастной микроскопии или суправитальной окраски если они не образуются спонтанно, можно вызвать их формирование путем добавления к пробе различных окислителей.
Следует учитывать, что проба не является специфичной при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогенгазы, поскольку эти тельца могут появляться при передозировке сульфаниламидов и отравлении анилиновыми красителями, а также дефиците других ферментов (глутатион-редуктазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы).

1. Следует объяснить пациенту, что исследование позволит выявить причину анемии.
2. Следует предупредить его, что для исследования необходимо взять пробу крови, и сообщить, кто и когда будет брать кровь из вены.
3. Пациента предупреждают о возможных неприятных ощущениях во время наложения жгута на руку и пункции вены.
4. Лечащий врач и врач-лаборант должны знать о приеме пациентом препаратов, которые могут повлиять на результат исследования. При необходимости эти препараты отменяют.
5. Каких-либо ограничений в диете и режиме питания перед исследованием не требуется.

1. После пункции вены кровь набирают в 3- или 4,5-миллилитровую пробирку с ЭДТА.
2. При образовании гематомы назначают согревающий компресс. При больших размерах гематомы необходим контроль пульса дистальнее места пункции вены.
3. Место пункции прижимают ватным шариком до остановки кровотечения.
4. После взятия крови больной может возобновить прием препаратов, которые пришлось отменить.

К элементам патологической регенерации относятся мегалобласты, мегалоциты, тельца Жолли, кольца Кебота, базофильная зернистость эритроцитов.

Тельца Жолли

Тельца Жолли - мелкие круглые фиолетово-красные включения размером 1-2 мкм, встречающиеся по два-три в одном эритроците. Они представляют собой остатки ядра мегалобласта, задерживающиеся в эритроците в связи с нарушением процесса освобождения мегалобласта от ядра в костном мозге. В нормальных условиях эти тельца можно обнаружить только у эмбриона и в крови новорожденных. В более позднем периоде тельца Жолли в периферической крови появляются при некоторых видах анемии, отравлениях гемолитическими ядами, а также после спленэктомии.

Кольца Кебота

Кольца Кебота представляют собой, по-видимому, остатки ядерной оболочки. Они имеют вид колечка, восьмерки или скрипичного ключа, окрашиваются в красный цвет. Встречаются только в условиях патологии, главным образом при B 12 - и фолиево-дефицитных анемиях.

Базофильная зернистость эритроцитов

Базофильная зернистость эритроцитов наблюдается при тяжелых формах анемий и токсических состояниях (например, отравлении свинцом). При окраске по Романовскому базофильная зернистость эритроцитов синего цвета. Она указывает на токсическое повреждение костного мозга и поэтому имеет неблагоприятное прогностическое значение. Базофильные гранулы, по-видимому, являются остатком базофильного вещества, аналогичного ре- тнкулоцитам.

Другие включения в эритроцитах

Из других включений в эритроцитах следует указать на зернистость, содержащую негемоглобинное, легко отщепляемое железо (гемосидерин, ферритин). Эритроциты с такими включениями названы сидероцитами и признаны предшественниками зрелых эритроцитов. Они включают ферритин в виде мелких гранул (0,5-1,5 мкм).

Количество их в периферической крови у здоровых людей составляет 0,5-0,8 %. Появление сидероцитов в большем количестве указывает на нарушение синтеза гемоглобина , что наблюдается при отравлении солями свинца, при некоторых гемолитических и гипохромной сидеробластической анемиях, реже при пернициозной анемии и талассемии. Иногда увеличенное количество сидероцитов появляется при многократных переливаниях крови или внутривенных введениях препаратов железа.

Если в периферической крови сидероциты обнаруживаются главным образом при патологических состояниях, то в костном мозге и в норме имеются сидеробласты - ядерные клетки эритроцитопоэза, в цитоплазме которых при специальной окраске выявляются гранулы железа. В норме количество сидеробластов в костном мозге составляет 20-40 % костномозговых эритробластов; при железо дефицитной анемии количество их уменьшается до 2- 5 %. Для выявления сидерофильных гранул в нормоцитах и эритроцитах применяются специальные методы окраски, при которых цитоплазма и ядро клеток окрашиваются в розовый цвет, а сидерофильные гранулы - в синий.

Иногда в эритроцитах можно обнаружить зернистость Шюффнера или пятнистость Маурера (при малярии), тельца Гейнца-Эрлиха (считаются первым признаком наступающего гемолиза и токсического поражения крови), ядерные пылинки Вейденрейха (признак глубокой дезинтеграции ядра), однако происхождение этих включений и их диагностическая ценность изучены еще недостаточно.

Тельца Хайнца (также известные как тельца Гейнца или Гейнца-Эрлиха) - это преципитаты окисленного гемоглобина в эритроците, при окрасках по Романовскому выглядящие как эозинофильные сферические включения, часто выступающие за границы эритроцита. Это достаточно распространенный маркер окислительного повреждения гемоглобина, часто, хотя и необязательно сопутствующий эксцентроцитам и метгемоглобинемии.

Наиболее часто тельца Хайнца можно увидеть у кошек, и это связано с некоторыми особенностями их физиологии. Во-первых, в отличие от большинства других видов, у кошек в молекуле гемоглобина есть шесть нестабильных сульфгидрильных групп, и их гемоглобин очень легко диссоциирует из тетрамера в димер. Во-вторых, их несинусоидальная селезенка крайне неэффективна в вопросах удаления включений с поверхности эритроцитов - поэтому, как и в случае с тельцами Хауэлла-Джолли, до 5% эритроцитов с тельцами Хайнца для кошки считается вариантом нормы. Ну и наконец, отсутствие некоторых ферментативных систем не позволяет им эффективно метаболизировать некоторые ксенобиотики, продукты промежуточного обмена которых часто и вызывают образование телец Хайнца.

В течение некоторого времени эритроцит может смещать образовавшееся тельце Хайнца к периферии по механизму, аналогичному выталкиванию телец Хауэлла-Джолли, и даже иногда избавляться от него, но чаще всего он не успевает это сделать. Тельце Хайнца само по себе изменяет реологические свойства эритроцита, он становится более хрупким, и в среднем продолжительность жизни эритроцитов резко сокращается. У кошек, поскольку селезенка тельца Хайнца не убирает, основным механизмом элиминации пораженных эритроцитов является гемолиз. В мазках часто можно наблюдать "призраки" эритроцитов - то есть, пустые мембраны без гемоглобина, - с ярко заметным тельцем Хайнца. На фотографии выше такие тоже есть.

К распространенным причинам окислительного повреждения эритроцитов относятся:
- применение парацетамола. К нему чувствительны опять же особенно кошки, но и у собак распространена гемолитическая реакция.
- отравление луком, чесноком. Это, конечно, касается преимущественно собак - заточить лука из-под шашлыков они всегда горазды, а вот кошек, трескающих подобные гадости, увидеть можно редко.
- пропиленгликоль у кошек. Раньше часто входил во влажные рационы, сейчас FDA не рекомендовала его применение в кошачьих кормах. Человек к пропиленгликолю чувствителен чуть менее чем никак, поэтому в человеческой еде его полно (любителям покормить со стола на заметку).
- любые системные заболевания, сопровождающиеся ацидозом. В моей личной тройке лидеров - диабет, особенно с кетоацидозом, септические плевриты, сопровождающиеся пиотораксом и дыхательной недостаточностью, и липидоз.
- отравление сильными окислителями (в основном тоже собачья тема): витамин К, антагонисты витамина К, цинк и многое другое.

Появление телец Хайнца далеко не всегда сопровождается клинически обнаружимой гемолитической анемией. При умеренной интенсивности поражения костный мозг обычно успевает ответить повышением эритропоэза, и в крови помимо них обнаруживается еще умеренная полихромазия.

S Tasker, MR Lappin. Haemobartonella felis: recent
developments in diagnosis and, treatment – Journal of
Feline Medicine and Surgery (2002) 4, 3–11

Немного истории

В 1942 году Кларк описал инфекционное заболевание у кошки с анемией в Южной Африке, назвав возбудителя Eperythrozoon felis . Позднее Flint & Moss (1953) опубликовали данные об аналогичном микроорганизме, вызвавшего инфекционную анемию у кошек в США. С 1955 года возбудитель данного заболевания переименован в Haemobartonella felis .

Инфекционная анемия кошек, вызванная H . Felis , распространена по всему миру. Возбудитель инфекционной анемии кошек (гемобартонеллез кошек) – Haemobartonella felis – плеоморфная некультивируемая безоболочечная гемотрофная бактерия.

Несмотря на то, что Haemobartonella felis является доказанной причиной развития инфекционной анемии у кошек, до сих пор остается много не раскрытых вопросов, касающихся эпизоотологии заболевания. Одним из сдерживающих факторов, ограничивающих полномасштабные исследования, является тот факт, что бактерию очень сложно культивировать вне организма хозяина. Однако в последние годы получили распространение молекулярно-генетические методы исследования. Филогенетический анализ, проведенный путем секвенирования гена 16S рРНК, указывает на близкое родство с родом Mycoplasma , а не с риккетсиями, как предполагалось ранее. Молекулярно-биологические методы позволили доказать, что Haemobartonella felis поражает эритроциты, а количество выделенной ДНК коррелирует с числом микроорганизмов в крови (Cooper и др., 1999). Последние работы зарубежных исследователей свидетельствуют о наличии нескольких штаммов и даже видов Haemobartonella .

До недавнего времени в связи с невозможностью культивирования микроорганизма, основным методом диагностики была цитология мазка крови. Погрешность этого метода очень высока. Существует множество факторов, приводящих как к ложноотрицательным, так и к ложноположительным результатам. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в настоящее время является методом выбора для диагностики гемобартенеллеза.

Диагностика гемобартонеллеза кошек

Наиболее распространенный метод диагностики гемобартонеллеза – микроскопическое исследование мазка крови с визуализацией микроорганизмов на поверхности эритроцитов. Возбудитель инфекционной анемии в таком случае должен быть дифференцирован от других включений в эритроциты, например тельца Хауэлла-Жолли или тельца Паппенгеймера, которые могут быть представлены в виде мелких синих гранул. Окраска мазка крови акридин оранжевого, а также флюоресцентные методы с использованием меченых антител более чувствительны, чем стандартная окраска по Романовскому. Однако, для проведения таких исследований необходим флуоресцентный микроскоп.

Фото 1. Окраска мазка крови по Райту-Гимза (увеличение ×1000). Кокковидные и круглые микроорганизмы H . felis на поверхности почти 50% эритроцитов.

Помимо окраски по Романовскому возможно использование других красителей (Грюнвальд-Гимза, Райта и Райта-Гимза). Возбудитель обычно расположен на периферии эритроцитов поодиночке, попарно или находится свободно рядом с клетками крови. Довольно часто ложноположительный диагноз ставится из-за артефактов, возникающих в результате неправильной сушки или фиксации мазка, кроме того возбудителя легко спутать с седиментом краски. Использование свежеприготовленного красителя с предварительной фильтраций является обязательным условием при диагностике гемобартонеллеза кошек микроскопическим методом. При наличии седимента красителя в мазке он обычно находится выше плоскости фокуса эритроцитов и имеет более интенсивную окраску в сравнении с Haemobartonella felis .

Тельца Хауэлла-Жолли – это остатки ядра эритроцита, которые могут быть дифференцированы от Haemobartonella felis по размеру (более крупные, 1-2 мкм в диаметре). Тельца Папенгеймера – скопления железа, в мазке визуализируются как мелкие слегка окрашенные синие гранулы внутри эритроцита.

Фото 2. Окраска мазка крови собаки по Райту (увеличение ×1000). Очень маленькие, плохо различимые светло-голубые зерна в некоторых эритроцитах – тельца Паппенгеймера. Эритроцит в центре поля содержит маленькую круглую темно-пурпурную структуру, которая является тельцем Хауэлла-Жолли.

Фото 3. Окраска мазка крови собаки по Райту (увеличение ×1000). В четырех эритроцитах содержатся темно-пурпурные цитоплазматические включения – тельца Хауэлла-Жолли, которые являются ядерными фрагментами.

При использовании цитологического метода следует учитывать, что высокие концентрации стабилизатора ЭДТА приводят к отщеплению бактерий с поверхности эритроцитов, что делает диагностику затруднительной. Поэтому оптимальным вариантом является приготовление мазков непосредственно сразу после забора крови или использование стабилизаторов, не обладающих таким эффектом, например, гепарин (Alleman и др., 1999).

Наиболее чувствительным и специфичным методом исследования является ПЦР, позволяющая обнаруживать ДНК возбудителя в крови больных животных. Наличие всего лишь 52 бактерий в крови кошки может быть обнаружено методом ПЦР (Cooper и др., 1999). Секвенирование последовательностей 16S рРНК возбудителя позволило сделать вывод о наличии нескольких штаммов Haemobartonella felis с разной патогенностью. Кроме того, филогенетический анализ показал родство данного микроорганизма с Eperythrozoon suis .

Широкое использование ПЦР позволило обнаружить, что 19,5% исследованных в США кошек являются носителем инфекции (Jensen и др., 2001). Аналогичные исследования были проведены в Великобритании. Распространенность этой инфекции приближалась к 18%.

ПЦР показывает высокую диагностическую эффективность в сравнении с другими методами. ПЦР позволяет выявить возбудителя уже в первые 8 дней после заражения. Однако, если исследование проводится в период применения антибиотиков, возможно получение ложноотрицательного результата. Поэтому кровь для исследования необходимо отбирать для анализа до начала курса антибиотикотерапии.

Если заболевание протекало бессимптомно, кошки являются источником возбудителя, по крайней мере, в течение 6 месяцев. Исследования клинически здоровых кошек в США и Великобритании показали, что 14,5% и 10% животных соответственно давали положительные результаты при исследовании методом ПЦР. Таким образом, становится очевидным, что интерпретировать результат ПЦР необходимо с учетом клинической картины и гематологического анализа крови.

В настоящее время диагностика гемобартонеллеза методом ПЦР доступна в Центре диагностики и профилактики болезней животных, в сети ветеринарных клиник «Вита». Исследование проводится с использованием технологии Real-time PCR, позволяющей проводить полуколичественный анализ содержания ДНК возбудителя в крови пациента.

Клинические признаки гемобартонеллеза

На клиническое проявление гемобартонеллеза влияет множество факторов, в том числе патогенность штамма и состояние иммунной системы животного. Животные с хронической инфекцией, как правило, выглядят здоровыми (Berent et al, 1998). С другой стороны, есть исследования, свидетельствующие о выраженной гемолитической анемией у всех зараженных животных, что более вероятно связано с патогенностью штамма.

Клинические признаки у больных животных неспецифичны и характеризуются анемией, вялостью, анорексией, потерей веса и депрессией. Часто наблюдается интермитирующая лихорадка, особенно при острой форме болезни. Возможны лимфаденопатия, спленомегалия, иктеричность слизистых оболочек в результате гемолиза эритроцитов. Гемобартонеллез обычно вызывает регенеративную анемию, сопровождающуюся ретикулоцитозом, анизоцитозом, микроцитозом и полихромазией. Тяжесть анемии зависит от стадии инфекции. Уровень гематокрита, как правило, падает ниже 20% и в среднем варьирует в пределах 15-18% (Foley и др., 1998, VanSteenhouse и др., 1993). В мазке крови можно обнаружить нормобласты.

Лечение

Haemobartonella felis чувствительна к тетрациклинам, которые специфически ингибируют синтез белка прокариот. Тетрациклин и окситетрациклин могут вызывать медикаментозную гипертермию (Wilkinson , 1968) и требуют использование каждые 8 часов. Препаратом выбора при данной инфекции является доксициклин за счет меньшего количества побочных эффектов. Рекомендуемая доза доксициклина составляет 5-10 мг/кг перорально 1 раз в день. Терапия должна продолжаться от 14 до 21 дней в зависимости от реакции на лечение.

Считается, что фторхинолоны являются эффективными в лечение микоплазменных инфекций. Однако использование энрофлоксацина в дозе 10 мг/кг перорально ежедневно в течение, по крайней мере, 14 дней показало относительно низкую эффективность в терапии гемобартонеллеза.

Азитромицин – макролид, использующийся при лечении микоплазмозов у человека, оказался также малоэффективным при лечении гемобартонеллеза в дозе 15 мг/кг перорально 2 раза в день (Westfall et al, 2001).

Анемия, вызванная гемобартонеллезом, требует использования глюкокортикоидов (VanSteenhouse et al, 1993). Однако, прежде должны быть исключены заболевания, которые могут обостряться при использовании глюкокортикоидов, например, токсоплазмоз. Рекомендуемая доза преднизолона составляет 2 мг/кг в сутки перорально параллельно с антибактериальной терапией. Дозировка преднизолона должна постепенно снижаться в течение 3 недель.

Итак, несколько выводов:

Если у кошки есть клинические признаки гемобартонеллеза и возбудитель обнаружен цитологически или методом ПЦР, лечение необходимо осуществлять незамедлительно;

Если исследование мазка крови является единственным доступным методом и при его исследовании получен отрицательный результат, который не согласуется с клинической картиной, кошку следует считать больной в связи с частыми ложноотрицательными случаями;

Если результат ПЦР отрицательный (забор крови до лечения), то кошка с высокой степенью вероятности свободна от возбудителя;

Поскольку при хронической инфекции невозможно обнаружить возбудителя в мазках крови, все кошки, использующиеся в качестве доноров крови, должны быть обследованы с использованием метода ПЦР;

Препаратом выбора при лечении гемобартонеллеза является доксициклин в дозировке 5-10 мг/кг перорально 1 раз в день в течение 14-21 дней.

Литература

Alleman AR, Pate MG, Harvey JW, Gaskin JM, Barbet AF (1999) Western immunoblot analysis of the antigens of Haemobartonella felis with sera from experimentally infected cats. Journal of Clinical Microbiology 37, 1474–1479

Berent LM, Messick JB, Cooper SK (1998) Detection of Haemobartonella felis in cats with experimentally induced acute and chronic infections, using a polymerase chain reaction assay. American Journal of Veterinary Research 59, 1215–1220

Cooper SK, Berent LM, Messick JB (1999) Competitive, quantitative PCR analysis of Haemobartonella felis in the blood of experimentally infected cats. Journal of Microbiological Methods 34, 235–243

Flint JC, Moss LC (1953) Infectious anaemia in cats. Journal of the American Veterinary Medical Association 122, 45–48

Foley JE, Harrus S, Poland A, Chomel B, Pedersen NC (1998) Molecular, clinical, and pathologic comparison of two distinct strains of Haemobartonella felis in domestic cats. American Journal of Veterinary Research 59, 1581–1588

Jensen WA, Lappin MR, Kamkar S, Reagen WJ (2001) Use of a polymerase chain reaction assay to detect and differentiate two strains of Haemobartonella felis infection in naturally infected cats. American Journal of Veterinary Research 62, 604–608

VanSteenhouse JL, Millard JR, Taboada J (1993) Feline haemobartonellosis. Compendium of Continuing Education for the Practising Veterinarian 15, 535–545

Westfall DS, Jensen WA, Reagan WJ, Radecki SV, Lappin MR (2001) Inoculation of two genotypes of Haemobartonella felis (California and Ohio variants) to induce infection in cats and the response to treatment with azithromycin. American Journal of Veterinary Research 62, 687–681

Wilkinson GT (1968) A review of drug toxicity in the cat. Journal of Small Animal Practice 9, 21–32

Здоровья Вам и Вашим питомцам.

к.в.н. Ключников А.Г.