Переливание (донорство) крови животных. Переливание крови у собак и котов

У животных, как и у людей, также существует деление типов крови по группам. Например, у кошек выделяют три группы, а у собак этих групп существует аж целых 11!

Собаки живые существа, которые подвержены болезням и различным травмам. Бывают ситуации, когда им, как и людям, необходимо переливание крови. Но и здесь не всякая кровь подойдет.

Для этого ученые изучают типы крови у собак, классифицируют ее по группам, делают банки крови. Чтобы в случае опасности жизни оказать помощь.

Информация о группах будет полезна и заводчикам при выведении пород или установлении отцовства.

Сколько групп крови у собак

Собачьи группы крови отличаются от человеческих. Выделяют 11 основных групп. Группы эти различны по составу белков на поверхности эритроцитов и типу антигена.

У собак отсутствует резус фактор. Группы крови никак не связаны с породами. Если группа подходит, то кровь можно смело переливать от овчарки к мопсу и наоборот.

Как обозначаются группы крови у собак?

В системе обозначения используются цифры 1-11 и буквы латиницы A,Tr, B, C, D, F, J, K, L, M, N.

Большинство собак разных пород имеют 1-ю группу крови (А). В зависимости от типа известных эритроцитных антигенов у собак принято междуврачебное обозначение DEA - Dog Erythrocyte Antigen. И различают 6 групп DEA1.1, DEA1.2, DEA3, DEA4, DEA 5, DEA 7.

Универсальная группа крови у собак

Группы DEA1.1— и DEA4+ считаются универсальными для донорства. Стоит помнить, что каждый организм уникален, и все равно необходимо делать тест на совместимость.

Совместимость крови проверяют смешиванием двух видов и наблюдают наличие антигенов. Либо применяют специальные тесты совместимости. В любом случае проверка на совместимость обязательна.

Где проверить группу крови собаке

Выяснить, какая у вашего питомца группа крови, можно в ветеринарной клинике. Эти данные вносят в паспорт животного.

В комплексе лечения переливание крови имеет очень важное значение. В клинической практике гемотрансфузии применяют с заместительной целью (перелитые эритроциты находятся в крови реципиента 30-120 дней), стимулирующей целью (действует на различные функции животного организма), с целью улучшения гемодинамики (увеличивается ОЦК, усиливается работа сердца, повышается минутный объем сердца и т.д.), гемостатической целью (переливание крови оказывает стимулирующее действие на систему гемостаза реципиента, вызывая умеренную гиперкоагуляцию, обусловленную увеличением тромбопластической и снижением антикоагулянтной функции крови) (О.К. Гаврилов, 1982).

У собак имеется семь групп крови, определяемых по антигенной принадлежности: А, В, С, D, Е, F и G. Фактор А у животных имеет такое же значение, как и резус-фактор у людей. Этот фактор имеется примерно у 60-65% животных. Повторное переливание крови животному, у которого этого фактора нет, может привести к тяжелым гемотрансфузиологическим последствиям – гемолизу крови и гибели животного.

Первое переливание крови, как правило, не вызывает тяжелых осложнений из-за слабо выраженных антигенных свойств факторов В-G. Однако в некоторых случаях могут наблюдаться аллергические реакции в виде крапивницы, зуда и т.п., которые могут развиться сразу (ранняя реакция) и спустя несколько дней (поздняя реакция). Во избежание этих осложнений необходимо проводить пробы на групповую и индивидуальную совместимость. Для этого необходимо к 1 мл сыворотки реципиента добавить 0,1 мл эритроцитов донора. Реакция производится на стекле при температуре 22-25 0 С. учет осуществляют через 5 минут. При отсутствии агглютинации можно приступать к биологической пробе на индивидуальную совместимость.

Биологическая проба на индивидуальную совместимость проводится путем струйного переливания 10-15 мл крови в течение 3 минут крупным породам собак и 3-5 мл – мелким. Проба проводится трехкратно. При этом у животного, по возможности, измеряется артериальное давление, частота пульса, число дыхательных движений до переливания и через 10-15 минут после струйного введения крови. Беспокойство животного, одышка, тахикардия или аритмия, падение давления, рвота, появление болевых ощущений свидетельствуют о несовместимости переливаемой крови.

При переливании крови следует учитывать, что наиболее подходящей для гемотрансфузии является свежая донорская кровь. Заготовленная заранее кровь уже к 10 дню имеет кислую реакцию (рН до 6,0) и содержит калий в высоких концентрациях (до 8 ммоль/л), что может вызвать аритмию и даже остановку сердца. При переливании заранее заготовленной крови ее необходимо подогревать на водяной бане до температуры 37 0 С, т.к. холодная кровь вызывает гипотермию миокарда, спазм периферических сосудов и ацидоз, легко уходит в кровяное депо. На каждые 200-250 мл цитратной крови вводится 5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция, 50 мл 40%-ного раствора глюкозы с 4 ед. инсулина и 20-30 мл 3%-го раствора соды (с целью нейтрализации гиперкалиемии и коррекции ацидоза) (А.А. Бунятян, 1982).

Заготавливая кровь, используют глюгицир (50 мл на 200 мл крови), или следующий состав:

Natrii citrici 2,2%

Ac. citrici 0,8%

Aq. destillatae 94,55%

Такой состав используется в количестве 15 мл на 100 мл крови (М. Закиевич, 1994). Кровь с консервантом можно хранить 21 день при температуре 4 0 С.

Забор крови от животного осуществляется путем венепункции толстой иглой и сливанием ее во флакон с приготовленным консервантом. Для предупреждения коагуляции крови в системе, последнюю необходимо предварительно промыть раствором гепарина или глюгициром, или ввести гепарин донору из расчета 100-200 ед. на 1 кг массы тела. Животному-донору предварительно вводят седативные препараты. Система для взятия крови не должна быть длиннее 25-30 см, т.к. кровь собак склонна к гиперкоагуляции и при большей длине трубки сворачивается в системе. Сосуд для сбора крови необходимо постоянно покачивать с целью перемешивания крови и консерванта.

Без ущерба для здоровья животного можно забирать кровь из расчета 10 мл/кг. Переливают кровь капельно с темпом 40-60 кап/мин из расчета 5-18 мл/кг в час. Повторный забор крови можно производить через 1,5-2 месяца.

При необходимости можно осуществлять заготовку трупной крови (от животных, погибших в результате травм). Заготовка крови в этом случае принципиально не отличается от описанной выше. Если забор крови производить из сердца, можно получить 80-90 мл на кг массы тела. Гепарин в этом случае вводится из расчета 120 ед/кг. Кровь от трупа можно забирать до 6 часов с момента гибели животного.

Для заготовки плазмы используют раствор следующего состава:

Ac. citrici 40.0

Ac. chlorici conc. 7 ml

Aq. destillatae 950 ml

На 900 мл крови добавляют 100 мл этого раствора. Кровь отстаивают в течение 1-2 часов, полученную плазму осторожно переливают в стерильные флаконы и запечатывают. При температуре –15 о С плазму можно сохранять в течение 2 лет. Плазма богата белком, переливание ее показано при острых нарушениях свертываемости крови, гипопротеинемии, интоксикации, для повышения коллоидно-осмотического давления крови.

В повседневной практике врачам довольно часто приходится сталкиваться с проведением различных трансфузиологических операций. Мы остановимся на некоторых из них, имеющих наибольшее значение в лечении больных животных.

Реинфузия крови – переливание крови, излившейся в плевральную или брюшную полости. Реинфузия крови является очень эффективной мерой лечения и предотвращает осложнения, связанные с переливанием донорской крови. Показанием для реинфузии является любая кровопотеря, допускающая использование излившейся в полости (плевральная, брюшная и т.д.) крови. Противопоказаниями являются: гнойное загрязнение излившейся крови, загрязнение излившейся крови мочой или кишечным содержимым, кровотечения, связанные с разрывом матки, почечная недостаточность.

Чаще всего врачу приходится иметь дело с реинфузией крови при разрывах легкого, печени, селезенки, внутрибрюшинных разрывов крупных сосудов. Наиболее простой способ сбора излившейся крови заключается в простом вычерпывании ее из полости ложкой или вымакивания марлей (последний способ значительно хуже, т.к. приводит к существенному разрушению эритроцитов). При сборе крови ее сливают в стерильный флакон с одним из стабилизаторов (глюгицир, цитрат натрия и др.), предварительно профильтровав ее через 4 слоя стерильной марли. После этого флакон закрывают и переливают кровь по обычной методике, осуществляя ее микрофильтрацию через фильтр системы для переливания крови.

Вторым способом забора крови для реинфузии является введение перфорированного трубочного дренажа в брюшную или плевральную полость посредством лапаро- или торакоцентеза. Такой способ позволяет собрать и реинфузировать кровь до оперативного вмешательства, что значительно снижает риск анестезиологического обеспечения, особенно при политравмах, сопровождающихся разрывом паренхиматозных органов и массивной кровопотерей. При эвакуации крови из брюшной полости необходимо убедиться в целостности мочевого пузыря (для этого его необходимо катетеризировать до выполнения лапароцентеза). Небольшие же повреждения кишечника, не сопровождающиеся массивным загрязнением собираемой крови, не являются противопоказанием к ее реинфузии (Е.А. Вагнер с соавт., 1977).

Внутрикостные трансфузии достаточны просты в исполнении, могут использоваться в тех случаях, когда внутривенное введение жидкостей затруднено (гнойные поражения кожи, массивные отеки конечностей и т.д.), а также у щенков и котят. Трансфузии осуществляются внутрикостным введением иглы с мандреном (костномозговая игла Кассирского) в эпифизы костей, крыло подвздошной кости. Перед введением иглы выбривают участок кожи, обрабатывают его как операционное поле (во избежание остеомиелита), прокалывают иглой кожу и подлежащие ткани до кости, затем, преодолевая костный кортикальный слой, получают ощущение "провала" иглы, удаляют мандрен, внутрикостно вводят 0,5-2 мл 2%-го раствора новокаина и проводят инфузию растворов под давлением. По окончании манипуляции кожу обрабатывают йодом и кубатолом.

Аутогемотрансфузия – переливание крови больному животному, взятой у него заблаговременно. Обычно такая необходимость возникает при повторном переливании крови, когда предполагается большая операция с массивной кровопотерей. У животного заблаговременно берут кровь (за 1-2 недели до предполагаемой операции), а затем ее же переливают во время оперативного вмешательства.

Реинфузия асцитической жидкости в сосудистое русло возможна у животных, больных циррозом печени, имеющих выраженный асцит, рефракторный к обычной диуретической терапии. Это позволяет избавиться от большого количества жидкости в брюшной полости, сохранив при этом белок, восстановить его уровень в плазме. Технически это выполняется следующим образом: после пункции брюшной полости асцитическую жидкость собирают в стерильный флакон, и тут же вводят ее внутривенно капельно со скоростью 10 мл/кг в час. За 1 сеанс можно реинфузировать от 10 до 30 мл/кг асцитической жидкости. Такие реинфузии могут проводиться 2-4 раза через 1-2 суток.

При острой кровопотере инфузионно-трансфузионная тактика зависит от количества излившейся крови.

Введение жидкостей должно осуществляться в две вены одновременно с введением крови.

При острых заболеваниях органов брюшной полости (перитонит, острая кишечная непроходимость) инфузионно-трансфузионная терапия должна проводиться в течение 1-2 часов перед оперативным вмешательством. При низком центральном венозном давлении, выраженной тахикардии объем вводимой жидкости может достигать 0,5 мл/кг/мин – в первый час и в дальнейшем зависит от показателя ЦВД. Интенсивная терапия должна продолжаться во время операции и в послеоперацинном периоде. Проведение интенсивной терапии в этих случаях должно быть направлено на устранение гиповолемии, коррекцию водно-электролитного баланса и КОС, дезинтоксикацию, восстановление реологических свойств крови.

Классификация групп крови основана на выявлении наследственных антигенов на поверхности эритроцитов (красных клеток крови). Антиген - это белок, который специфично связывается с антителом. Антитела принадлежат к особому классу гликопротеинов, которые расположены на поверхности защитных клеток крови. Их основная функция - обнаружение и нейтрализация чужеродных объектов. Аллореактивные антитела направлены против антигенов клеток другого организма того же биологического вида. Они могут быть получены с молоком матери, а могут появиться после первого переливания крови. Если во время проведения гемотрансфузии смешать кровь, в которой присутствуют специфичные антиген и антитело, это приведет к тяжелым последствиям.

У собак выделяют более 13 групп крови.

Какая группа крови у вашей собаки важно знать, если планируется переливание крови (гемотрансфузия). При данной процедуре существует большой риск получить разнообразные осложнения. Легкая лихорадка обычно неизбежна и не представляет серьезной угрозы здоровью пациента. Однако при неправильном подборе пары донор-реципиент возникают различные иммунно-обусловленные процессы, которые могут протекать остро или имеют отсроченный эффект. Такие реакции способны значительно ухудшить состояние вашей собаки или привести к ее гибели.

Название групп крови включает также классификацию DEA (или dog erythrocyte antigen system) - собачий эритроцитарный антиген.

DEA 1.1, 1.2 и 1.3

DEA 1 или группа А представлена 4 аллелями: негативная, DEA 1.1, 1.2 и 1.3. DEA 1.1 наследуется по аутосомно-доминантному принципу по отношению к DEA 1.2, а нулевой тип рецессивен к ним обеим.

DEA 1.1 и DEA 1.2 являются самыми важными антигенами у собак и представлены в 60% случаев, однако путаница возникает, когда собак с разными DEA объединяют в одну группу A . Так, при переливании собаке с DEA 1.2 крови от собаки с DEA 1.1, в крови пациента может возникнуть множество антител к DEA 1.1.

При первой гемотрансфузии это приведет к снижению продолжительности циркуляции полученных эритроцитов в сосудистом русле, а при повторном переливании крови может сопровождаться острой гемолитической реакцией, разрушением клеток крови, шоком , гибелью собаки.

DEA 4

Наиболее распространен среди собачьей популяции (90%) и, если у собаки присутствует только этот антиген, она считается универсальным донором. Известных антител к DEA 4 не существует, однако иногда гемолитическая реакция наблюдается при переливании DEA 4 в кровь собаке, у которой этот антиген отсутствует.

DEA 3 и 5

В повседневную практику современных ветеринарных клиник прочно вошла и стала обычным делом процедура переливания крови - гемотрансфузия. Травмы, огнестрельные ранения, операционные и послеродовые кровотечения, тяжелые желудочно-кишечные кровотечения, отравления, последствия тяжело перенесенного пироплазмоза и множество других заболеваний, сопровождающихся анемией (малокровием) - все это состояния, которые без переливания крови могут закончиться летально. И до недавнего времени так оно и было. Став ежедневной рутинной процедурой, переливание крови спасло жизнь сотням животных. Но для того, чтобы, в случае необходимости, гемотрансфузия была проведена грамотно, без осложнений, связанных с переливанием несовместимой крови, каждый владелец собаки должен знать группу крови своего питомца.

Не секрет, что первое переливание крови в жизни собаки переносится легко в подавляющем большинстве случаев и не приводит к анафилактическим реакциям. Но, начиная со второго переливания, уже необходимо использовать донорскую кровь, совпадающую по основным, наиболее критичным факторам. Учитывая довольно широкое распространение гемотрансфузии на сегодняшний день, все чаще в клинику попадают животные, которые уже имеют в своем анамнезе переливания крови. А владельцам обязательно нужно помнить, что вторая и все последующие гемотрансфузии в жизни Вашего питомца уже будут небезопасны без определения группы крови.

Что же такое группа крови у собаки?

Начнем с того, что такое групповой антиген? Это вещество, а точнее - белок, который присутствует в крови данного организма (на поверхности каждого эритроцита), и который при попадании в другой организм воспринимается им как «чужой». При этом происходит иммунный ответ с выработкой антител. При повторном попадании «чужой» крови иммунный ответ настолько силен, что возникает прямая угроза здоровью и даже жизни пациента.

Группы крови людей и группы крови у собак - это не совсем одно и то же. У людей выделяют два основных (и несколько дополнительных, встречающихся редко) групповых антигена: А и В. Кроме того, у людей определяют еще резус-фактор, который тоже обладает антигенными свойствами, и который в крови человека либо есть, либо нет. Таким образом, у людей основных групп крови четыре: 0(I), А(II), В(III), АВ(IV), каждая из которых может быть резус-положительной или резус-отрицательной.

У собак резус-фактора нет, а групповых антигенов известно уже более десятка. Их фактическое число и роль в организме собаки, антигенные возможности и биологические свойства еще долго будут предметом изучения специалистов.

На сегодняшний день для известных групповых антигенов собак принято международное обозначение: DEA - Dog Erythrocyte Antigen. Отдельные антигены (или групповые факторы) обозначают цифрами: DEA 1.1, DEA 1.2, DEA 3, 4, 5 и т.д.

ДЛЯ УСПЕШНОЙ ГЕМОТРАНСФУЗИИ ВАЖНО ЗНАТЬ ФАКТОР DEA 1.1 !

Именно DEA 1.1 обладает сильнейшими антигенными свойствами, так как способен вызывать мощные иммунные реакции. Остальные групповые факторы собак на практике не ведут, в случае несовместимости, к таким тяжелым клиническим осложнениям.

Наша лаборатория имеет возможность определять фактор DEA 1.1. Он или есть в крови собаки (собака DEA 1.1 - положительная), или его нет (DEA 1.1 - отрицательная). Согласно европейской статистике, около 45% собак являются DEA 1.1 - положительными, остальные - отрицательными.

Собаки, положительные по DEA 1.1, являются универсальными реципиентами , то есть им можно переливать кровь любой другой собаки, но в идеале, от собаки DEA 1.1 + (уточним, что собака-донор должна быть абсолютно здоровой, и не иметь в анамнезе переливаний крови). Собака DEA 1.1 + может быть донором только для такой же, DEA 1.1 - положительной собаки.

Собаки, отрицательные по DEA 1.1, являются универсальными донорами , то есть их кровь можно переливать другим собакам, а им самим только такую же, DEA 1.1 - отрицательную кровь. Но опять же, в идеале, переливать кровь лучше от положительной собаки - положительной и от отрицательной - отрицательной.

Что будет, если отрицательной собаке перелить положительную кровь? Изначально в крови такой собаки антител к фактору DEA 1.1 нет, поэтому первое переливание практически всегда проходит успешно, без клинически выраженных иммунных реакций. Но такая собака на всю жизнь остается чувствительной к данному, чужому для нее, веществу, так как в ее крови образовалась «армия» соответствующих антител. Повторное переливание крови, если оно проводится наугад, без учета группы крови, может оказаться для этой собаки смертельным. И, кроме того, если такая собака - сука, то владельцам следует избегать вязок с DEA 1.1 - положительными кобелями, ведь часть ее потомства окажется положительными. А так как антитела матери легко проникают через плацентарный барьер к плодам, а также содержатся в молозиве, новорожденные щенки будут страдать гемолитической анемией и могут погибнуть, возможна также внутриутробная гибель плодов.

Итак, в определении группы крови нуждается каждая собака! И то, какой у нее фактор DEA 1.1: положительный или отрицательный, должно быть указано в ветеринарном паспорте. Ответственные владельцы собак беспокоятся о будущих потребностях своего питомца заранее!

Владельцы собак, отрицательных по DEA 1.1, помните: ваша собака может стать настоящим героем-спасителем для чьего-то любимца, ведь она - универсальный донор!

Для применения в лабораторных условиях

ВАЖНОЕ ПРИМЕЧАНИЕ О ФОРМАТЕ ТЕСТОВОЙ ПЛАТЫ
Просьба внимательно прочесть и соблюдать последовательность этапов.

Вещества, лиофилизованные в лунках с положительным контролем и с пробой пациента, неодинаковы.
Результаты анализа получены только с использованием пробы крови пациента, как в лунке с положительным контролем, так и в лунке с пробой пациента.

Описание и назначение:

Хотя общеизвестен факт, что у собак нет изоантител к несовместимым группам крови, и поэтому они в целом хорошо переносят переливание крови при несовместимости групп, но рациональная ветеринарная практика призывает избегать переливания несовместимых групп крови, за исключением неотложных состояний. Период полувыведения переливаемых несовместимых клеток будет довольно непродолжителен, и поэтому возможно, что должный терапевтический результат не будет достигнут. Также необходимо учитывать потенциальные потребности пациента в будущем. Антитела, получаемые от переливания несовместимой крови, могут образоваться только спустя 5-7 дней, и будут обладать долговременной жизнеспособностью. Это исключает возможность использовать в последствии несовместимую кровь при критическом положении.
К тому же, специалисты по разведению животных должны обратить особое внимание на антитела, вырабатываемые у самок при сенсибилизации в результате переливания крови несовместимых групп. Так как антитела присутствуют в молозиве, то самки с антителами к определенной группе крови не должны скрещиваться с самцами с этой группой крови, если предполагается, что они будут выкармливать будущих щенят. У грудных щенят разовьется гемолиз, обусловленный наличием изоантител, и они могут быть восприимчивы к заболеванию или даже умереть в результате гемолитической анемии. На поверхности эритроцитов собак идентифицированы восемь специфических антигенов. На этих антигенах основывается принятая во всем мире система групповых антигенов крови у собак, «DEA» (Dog Erythrocyte Antigen = Эритроцитарный Антиген Собак). В ней характеризуются восемь общих групп крови, антигены DEA 1.1, 1.2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8.
DEA 1.1, 1.2 – наиболее значимые антигены в крови собаки. Оба они высокоаллергенны, но DEA 1.1 – основной литический фактор в гемотрансфузиологии собак. Хотя все группоспецифические антигены системы АВ0 могут стимулировать образование изоантител, DEA 1.1 обладает сильнейшим стимулирующим потенциалом. Поэтому большинство реакций в результате переливания несовместимых клеток происходит, когда DEA 1.1-положительная кровь дается DEA 1.1- отрицательному реципиенту. Клинические значимые реакции при DEA 1.2 могут возникнуть, но слабее, чем при DEA 1.1. DEA7 может быть фактором при трансфузионных реакциях, но так как это холодовый агглютинин и изоантитело природного происхождения, считается, что у него очень низкая клиническая значимость. Считается, что оставшиеся антигены вызывают клинически незначительные проблемы при переливании.
В идеале предполагается, что вся переливаемая кровь DEA 1.1 и 1.2-отрицательная. Некоторые породы, например, борзые, особенно подходят в качестве доноров в связи с тем, что антигены DEA 1.1, DEA 1.2 и DEA 7 встречаются редко. Тем не менее, пока повсеместно не принята концепция банка собачьей крови, при которой кровь можно было бы приобрести незамедлительно, нормой остается переливание от собак, которые представлены в регионе в нужное время.
По оценкам 40% всех собак - DEA 1.1-положительные. Поскольку у некоторых собак происходит аутоагглютинация, и поскольку от очень анемичной собаки могут получиться сомнительные результаты, то прежде чем получать какую-либо информацию, показано типирование. Определение у собаки DEA 1.1-положительность либо отрицательность при рождении намного упрощает принятие решения в будущем. DEA 1.1-положительная собака может получать как DEA 1.1-положительную, так и отрицательную кровь. DEA1.1-отрицательная собака не должна получать DEA1.1-положительную кровь. RapidVet-H (Canine 1.1) предназначен для использования при классификации собак на DEA 1.1-положительных и отрицательных.

Условия проведения процедуры:

• Для получения точных результатов очень важно соблюдать последовательность операций.
• Всегда использовать новую пипетку для нового образца и новую мешалку для новой лунки. Повторное использование любого средства приведет к перекрестной контаминации и неточным результатам.
• Отдельные компоненты системы имеют разную стабильность. Хранить компоненты в соответствии с указаниями на маркировке. Не использовать компоненты после истечения указанного срока годности. Использование материалов с истекшим сроком годности может стать причиной недостоверных результатов.
• Разбавитель поставляется в бутылке с резьбовой крышкой для того, чтобы свести к минимуму непреднамеренное бактериальную либо иную контаминацию. Не использовать разбавитель из других источников в лаборатории.
• Механическая целостность пробы пациента крайне важна для правильности результатов.
• Всегда забирать полный шприц или пробирку с содержанием ЭДТА. Меньшее количество крови приведет к высокой концентрации ЭДТА в анализируемом образце.

Известные мешающие вещества: нет
Утилизация: Все биологические материалы, пипетки и мешалки утилизировать безопасным способом в соответствии со стандартами

Принцип и интерпретация анализа:

Анализ RapidVet-H (Canine DEA1.1) основан на реакции агглютинации, которая происходит, когда эритроцит, содержащий антиген DEA 1.1 на мембране поверхности взаимодействует с мышиным моноклональным антителом, специфичность которого к DEA 1.1 доказана, которое лиофилизуется на тестовой плате. Моноклональное антитело повторно растворяется разбавителем до формы антисыворотки, и тщательно перемешивается с цельной кровью пациента. Все DEA 1.1-положительные эритроциты реагируют с антисывороткой, вызывая агглютинацию. Антисыворотка совершенно не реагирует со всеми DEA 1.1-отрицательными эритроцитами. Результаты определяются визуально.

Внимание: У некоторых собак проявляется аутоагглютинация разной степени в связи с сывороточными факторами, которые вызывают у пациента агглютинацию собственных эритроцитов. Если это проявляется у пациента в опытных условиях, то этого пациента невозможно будет определенно типировать без выделения сыворотки и последовательной промывки оставшихся эритроцитов перед проведением анализа. В RapidVet-H (Canine DEA 1.1) имеется лунка для скрининга таких пациентов.

Реагенты и материалы:

Платы для агглютинационной пробы. На каждой плате имеется 3 визуально определяемых лунки, обозначенных как "Солевой скрининг на аутоагглютинацию", "DEA 1.1 положительный контроль" и "Проба пациента". Платы упакованы в индивидуальную упаковку с этикеткой, в каждой содержится пакет с осушителем. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C). 1 бутылка с разбавителем. Прозрачная пластиковая бутылка содержит 0.02 моль/л фосфатного буфера (ФСБ) с pH 7.4. Капельный наконечник дозирует 50 мкл. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C).
Пипетки и мешалки. В каждом полиэтиленовом пакете содержатся пластиковые пипетки и мешалки.

Хранение и стабильность:

• Платы для агглютинационной пробы стабильны при комнатной температуре (20-25°C) в течение 19 месяцев с даты изготовления. На каждой тестовой плате пропечатана дата истечения срока годности. Хранение в холодильнике (2-7°C) существенно не увеличивает период стабильности, но не оказывает отрицательного влияния на анализ и защищает от неожиданных или даже неустановленных изменений комнатной температуры вне данного диапазона. Нет необходимости выдерживать тестовую плату при комнатной температуре перед использованием.
• Разбавитель стабилен 24 месяца с даты изготовления. На каждой бутылке нанесена дата истечения срока годности.

ПРИМЕЧАНИЕ: На каждой тест-системе RapidVet-H (Canine 1.1) напечатана дата истечения срока годности, которая представляет собой ближайшую дату истечения срока годности среди компонентов системы. Не смотря на то, что у некоторых компонентов индивидуальные даты истечения срока годности могут быть позднее, их применение с другими компонентами из других систем не рекомендуется.

Последовательность операций:

• ЗАБРАТЬ у пациента минимум 0.4 мкл. крови в шприц или в пробирку, покрытую любо содержащую ЭДТА в качестве антикоагулянта. Для анализа требуется всего 100 мкл. цельной крови.
• ДОСТАТЬ тестовую плату из пластиковой упаковки.
• НАПИСАТЬ на плате кличку/номер собаки и дату проведения анализа.
• ПОМЕСТИТЬ тестовую плату на плоскую поверхность.
• ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию".
• ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию". Эта лунка не содержит реагентов. С помощью мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд. (См. Примечание 1 по правильному использованию пипетки). У небольшого процента больных собак и здоровых собак происходит аутоагглютинация. Если наблюдается аутоагглютинация, ПРЕКРАТИТЬ анализ и перед тем, как продолжить, провести стандартную процедуру промывки клеток.
• ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в каждую из 2 оставшихся лунок. Разбавитель помогает при реконструкции лиофилизованного материала в контрольной лунке и в лунке пациента.
• ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Положительная проба", и 1 каплю – в лунку, обозначенную "Проба пациента". С помощью новой мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ, распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд.
• ПОТРЯСТИ плату поперечным движением в течение 2 минут, обеспечивая перемешивание и "переворачивание" материалов внутри каждой лунки.
• УСТАНОВИТЬ плату под углом 20-30 ° на 2 минуты, чтобы избыток крови сбежал вниз лунки. Этому поспособствует размещение пакета с осушителем в верхней части платы.
• СЧИТАТЬ результаты и отметить лунки, в которых произошла явная агглютинация.

ПРИМЕЧАНИЕ 1: Использование пипетки: Удерживать пластиковую часть между большим и указательным пальцами у плоского заделанного конца, плотно нажать и не ослаблять давление. Удерживать часть для образца вертикально, поместить открытым концом пластиковой части ниже поверхности образца. Ослабить давление пальцев и забрать пробу. Далее удерживать пипетку в перпендикулярном положении прямо над лункой, в которую доставляется проба. Слегка нажать и выпустить одну каплю в лунку (50 мкл.). Дизайн пипетки таков, что выделяется немного более 50 мкл. для компенсации того небольшого количества образца, которое остается на мешалке.
Каждую пипетку использовать один раз, затем утилизировать. Ни при каких обстоятельствах не использовать пипетку повторно, так как может возникнуть перекрестная контаминация, приводящая к неточности результатов анализа.

Результаты:

Если анализ проведен правильно, в лунке, обозначенной "DEA1.1 Положительный контроль", должна произойти визуально определяемая, явная агглютинация.

ПРИМЕЧАНИЕ: Единственное назначение лунки "DEA 1.1 Положительный контроль" – контролировать правильность проведения анализа. Материал, лиофилизованный в лунке "DEA1.1 Положительный контроль" не тот же, что в лунке "Проба пациента".
Если проявляется явная агглютинация пробы пациента в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-положительный. Если визуально не обнаружено агглютинации в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-отрицательный. Любая мелкозернистость, гранулярность, появляющаяся спустя 2 минуты, не учитывается при определении результатов. Скорость агглютинации и размер сгустков клеток у DEA 1.1-положительных пациентов может быть разной. В отличие от людей, некоторые животные могут обладать более чем одной первичной группой крови. В таком случае эритроциты могут нести антигены по каждой такой группе. Такое животное будет нести меньше антигенов DEA 1.1, чем животное, у которого в качестве первичной группы крови только DEA 1.1.
Если пациент очень анемичен, то агглютинация образца может быть разъединенной, в форме небольших скоплений, каждое с головку большой булавки, а не в виде явной агглютинации.