Медицинское значение имеют три группы гельминтов-нематоды (круглые черви), цестоды (ленточные черви) и трематоды (сосальщики).
Для видовой идентификации яиц гельминтов используются следующие признаки.
1. Размеры . Измеряют длину и ширину яиц, которые обычно имеют определенную у каждого вида величину.
2. Форма . Для каждого вида характерна своя особая форма яиц.
3. Стадия развития при выделении во внешнюю среду . У одних Видов яйца состоят из одной клетки; у других в яйце может быть несколько клеток; у третьих яйца обычно эмбрионированы (т.е. они содержат личинки) при выделении с фекалиями во внешнюю среду. Иногда, если пробы фекалий исследуют через несколько часов или спустя 1-2 дня после дефекации, яйца гельминтов развиваются до более взрослых стадий. В идеале на анализ следует принимать только свежие пробы фекалий.
4. Толщина оболочки яйца. Яйца некоторых видов, например аскарид, имеют толстую оболочку; у других видов гельминтов, например у анкилостомид, оболочка яиц тонкая.
6. Наличие морфологических особенностей , таких, как крышки, шипы, пробки, крючочки или фестончатая наружная оболочка.
При обнаружении яйца гельминта или похожего на него объекта следует тщательно оценить все перечисленные выше признаки, чтобы установить видовой диагноз.
Для того чтобы установить видовую принадлежность яиц гельминтов, необходимо определить их размер, форму, стадию развития, толщину оболочки, цвет и наличие морфологических особенностей, таких, как крышечки, шипы, пробки, крючочки и бугристая наружная оболочка.
Для установления видового диагноза используют специальные определители и схематические изображения яиц гельминтов.
Рис. 34.2. Относительная величина, форма и структура яиц гельминтов.
1. ИССЛЕДОВАНИЕ ИСПРАЖНЕНИЙ.
Гельминтологические исследования проводятся с целью диагностики гельминтозов путем обнаружения в патологическом материале яиц, личинок, взрослых гельминтов или их фрагментов. Поскольку большинство гельминтов в половозрелой стадии развития находится в желудочно-кишечном тракте или в сообщающихся с ним органах, чаще всего применяются макро- и микрогельминтоскопические методы исследования фекалий (не более суточной давности).
С целью повышения достоверности обследования анализы должны быть повторены несколько раз ежедневно с промежутком 1-3 дня.
1.1. МАКРО ГЕЛЬМИНТОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ИСПРАЖНЕНИЙ
Метод отстаивания . Суточную порцию фекалий тщательно промывают водой, пока вода над осадком не станет прозрачной. Слив верхний слой, переносят осадок в чашку Петри и на темном фоне просматривают его под лупой или невооруженным глазом.
Метод отсеивания. Перемешанные с водой фекалии помещают на систему сит специального прибора. После промывания водопроводной водой сита переворачивают и, смыв содержимое в чашки Петри, просматривают невооруженным глазом или под лупой.
1.2. МИКРО ГЕЛЬМИНТОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Используют гельминтоовоскопические и гельминтоларвоскопические методы с целью обнаружения яиц гельминтов и их личинок.
1.2.1. ГЕЛЬМИНТООВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
При использовании гельминтоовоскопических методов обнаружения гельминтов вначале готовят двоякого рода мазки – нативный и толстый .
Þ Нативный мазок. Небольшое количество фекалий растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина или кипяченой воды. Крупные частицы осторожно удаляют, смесь накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (просматривают два мазка).
Делая нативный мазок, следует знать, что при слабых инвазиях в нем редко обнаруживаются яйца гельминтов.
Þ Толстый мазок с целлофаном по Като. Метод основан на обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке кала, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовым зеленым. Подготовленный толстый мазок фекалий покрывают кусочком целлофана, смоченного смесью глицерин-фенол влажного целлофана. Препарат исследуют через 30–60 мин, когда он слегка подсохнет и просветлится, вследствие чего яйца гельминтов легко обнаружатся под малым увеличением микроскопа.
В большом мазке хорошо видны окрашенные крупные яйца гельминтов, несколько хуже – прозрачные яйца карликового цепня. Для обнаружения мелких яиц этот метод непригоден.
Þ Методы обогащения
Среди методов обогащения используют методы флотации (всплывания) и седиментации (осаждения).
А). Методы флотации основаны на применении насыщенных растворов различных химических веществ, в которых яйца всплывают благодаря разнице удельного веса.
Метод всплывания по Фюллеборну основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе хлорида натрия (удельный вес 1,18), что дает возможность выявления яиц при небольшом их количестве. Метод более эффективен, чем изучение нативного мазка. Достоинствами является доступность и дешевизна. Данный метод хорошо выявляет яйца нематод и карликового цепня.
Однако яйца трематод, тениид, неоплодотворенные яйца аскарид не всплывают в данном растворе. Поэтому требуется обязательно исследовать не только поверхностную пленку, но и осадок, что усложняет метод. К недостаткам относится и замедленное всплывание яиц: яйца карликового цепня всплывают через 15-20 мин, аскарид – через 1,5-2 часа, власоглава – через 2-3 часа.
Метод Е.В.Калантарян также метод обогащения, но более эффективен и проще. Применяется насыщенный раствор нитрата натрия с относительной плотностью 1,38. Поэтому яйца большинства гельминтов всплывают и обнаруживаются в поверхностно пленке, исследование осадка не требуются.
Недостаток метода – дефицит нитрата натрия, а также то, что яйца трематод, онкосферы тениид не всплывают и остаются в осадке.
Б). Метод осаждения (седиментации) яиц гельминтов основаны на использовании химических веществ, растворяющих жиры и белки фекалий.
Метод П.П.Горячева основан на принципе осаждения яиц. Мазок в этом случае получается светлый, что облегчает обнаружение мелких яиц трематод.
Метод Горячева был предложен для обнаружения яиц описторха и оказался эффективнее, чем исследование нативного мазка и метода Фюллеборна. В настоящее время для диагностики описторхоза (клонорхоза) рекомендуются методы Като и Калантарян, как достаточно эффективные и технически более простые.
1.2.2. ГЕЛЬМИНТОЛАРВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (выявление личинок)
Метод закручивания по Е.С.Шульману. Метод предложен для обнаружения в кале личинок гельминтов, в первую очередь стронгилоидов . Исследуют только свежевыделенные фекалии, которые размешивают палочкой в 5-кратном количестве воды. Через 20-30 ск после начала размешивания палочку быстро вынимают, образовавшуюся на ее конце каплю жидкости переносят на предметное стекло и микроскопируют.
Метод Берманна основан на способности личинок гельминтов мигрировать по направлению к теплу и служит для их выявления в фекалиях, в первую очередь при подозрении на стронгилоидоз.
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДРУГИХ ЭКСКРЕТОВ И СЕКРЕТОВ
В дуоденальном содержимом микроскопируют имеющиеся в нем хлопья и плотные включения, а затем, разлив его по пробиркам, добавляют равный объем серного эфира, центрифугируют и исследуют осадок.
В рвотных массах изредка обнаруживаются гельминты или их фрагменты (например, при прорыве нагноившейся эхинококковой кисты из легкого в бронхи с рвотой выделяется светлая водянистая или гнойная жидкость). Диагноз ставится на основании обнаружения обрывков кутикулярной оболочки, сколексов и крючьев эхинококка.
Исследование мочи.
Мочеполовой шистосомоз диагностируют путем выявления яиц и мирацидиев. Яйца возбудителя мочеполового шистосомоза (Schistosoma haemotobium) крупные и достигают в длину 120-150 мкм, они имеют терминальный шип на одном конце. Внутри яйца можно увидеть зародыш (мирацидий). Иногда возникает необходимость установить, являются ли обнаруженные яйца жизнеспособными. Это можно определить, если препарат свежий и к нему не добавлялись консерванты. При хронической форме шистосомоза у больных к концу мочеиспускания выделяется кровь, но яйца в моче находят редко, вследствие чего рекомендуется прибегать к биопсии мочевого пузыря.
Яйца парагонимуса, обитающего преимущественно в легких, в случае локализации в почке, мочеточниках, стенках мочевого пузыря попадают в мочу. В хилезной моче выявляются микрофилярии.
Исследование мокроты.
В мокро те могут находиться яйца парагонимусов, шистосом, личинки мигрирующих нематод, фрагменты эхинококкового пузыря. При некоторых гельминтозах в мокроте наблюдаются характерные изменения. При парагонимозе , например, в мокроте можно обнаружить скопления яиц в виде желтоватых комочков.
Чаще всего заражение гельминтами происходит через зараженную пищу, воду, а также через немытые руки.
Прямые и косвенные методы диагностики гельминтозов
На сегодняшний день разработано множество методов диагностики гельминтозов, однако всех их можно разделить на две большие группы: прямые и косвенные. К прямым методам диагностики относятся те исследования, которые позволяют непосредственно выявить гельминты, их фрагменты, личинки или яйца. Косвенные методы диагностики гельминтозов основываются на выявлении вторичных изменений, характерных для той или иной разновидности гельминтоза.
Самыми популярными прямыми методами диагностики гельминтозов являются макро- и микрогельминтоскопические методы исследований.
Макрогельминтоскопические методы исследования
Вопросы читателей
18 October 2013, 17:25 Добрый день. Уже около почти год ощущаю зуд вокруг анального отверстия. Никаких болевых ощущений. Подскажите к кому обратится и что это может быть? Спасибо
Задать вопросМикрогельминтоскопические методы исследования
Иммунологические методы исследования
Диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.
Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов.
Анализ желчи и дуоденального содержимого
Биопсия
Электропунктурная диагностика
Электропунктурная диагностика основана на анализе сопротивления кожи при раздражении ее слабым электрическим током. Электропунктурная диагностика при подозрении на гельминтоз может проводиться двумя способами: по методу Фолля или с помощью резонансного тестирования.
Инструментальные методы исследования
При гельминтозах также проводится ультразвуковое исследование, ФЭДГС, и компьютерная диагностика. Эти методы позволяют определить степень вреда, нанесенного гельминтами, а также определить состояние отдельных органов.
Исходный уровень знаний и навыков.
Учащийся должен знать:
1. Представителей трематод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.
2. Жизненные циклы, пути заражения трематод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий
Учащийся должен уметь:
1. Определить яйца трематод по рисункам, таблицам.
2. Формировать меры профилактики.
3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.
4. Определять яйца трематод в препаратах, соблюдать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.
Структура занятия:
Теоретическая часть:
Ø Микролекция.
Практическая часть:
Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия
Микролекция.
Сбор и доставка материала
Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.
Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.
Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.
Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.
Практическая часть:
Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.
При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.
Метод нативного мазка
Оборудование:
предметные стекла;
широкая кювета;
пластиковые палочки;
карандаш;
50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);
сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.
3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.
4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.
5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).
6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.
Метод толстого мазка под целлофаном.
Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.
Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:
а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)
Оборудование:
широкая кювета;
полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;
смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);
резиновые пробки крупные;
пинцет анатомический;
пластиковые палочки;
карандаш;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.
2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.
3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.
4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.
5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).
6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
7. Убрать рабочее место, вымыть руки.
Метод большого мазка.
Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.
Оборудование:
предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;
пластиковые палочки;
50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);
сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;
микроскоп;
эмалированная кювета;
карандаш.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.
3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.
4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.
5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см 2 . Мазок не покрывать покровными стеклами.
6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).
7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.
8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
9. Убрать рабочее место, вымыть руки.
При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6-10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.
Похожая информация.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ
Строение члеников ленточных гельминтов изучают, помещая их между двумя предметными стеклами. Членики бычьего цепня крупнее члеников свиного и лентеца широкого, они имеют больше боковых маточных ответвлений, чем у свиного цепня, - около 30 (против 7-10) (рис. 14, 15).
Членики широкого лентеца короткие, широкие и имеют в центре розетковидное выпячивание - матку (рис. 16).
Подвижны только членики бычьего цепня.
Головка каждого из цестод отличается некоторыми особенностями. Головка свиного солитера снабжена четырьмя присосками и хоботком с двумя рядами крючьев (вооруженный цепень). На головке бычьего цепня крючья отсутствуют (невооруженный цепень). Головка широкого лентеца имеет по бокам две ботрии - щели, с помощью которых широкий лентец прикрепляется к слизистой оболочке кишки (рис. 17, 18, 19).
Для выявления гельминтов исследуют испражнения, перианальную и ректальную слизь, дуоденальное содержимое, мокроту, кровь и частицы тканей. Важное значение в микрогельминтологических исследованиях имеет овоскопия, которая дает возможность поставить диагноз по форме яиц при микроскопии препаратов из кала, желчи. Некоторые гельминты локализуются вне кишок (цистицерк, трихинеллы, эхинококк). В этих случаях для диагностики используют иммунологические методы исследования, биопсию и др.
При микроскопии необходимо брать свежие испражнения либо консервировать их в 5% растворе формалина во избежание высыхания кала, при котором изменяется форма яиц и затрудняется правильная диагностика.
Исследуют их микроскопией нативного мазка, после обогащения - методом Фюллеборна, Телеманна и др.
Для приготовления нативного препарата небольшую часть фекалий берут из разных участков доставленной порции, тщательно растирают на предметном стекле в капле физиологического раствора хлорида натрия или 50% раствора глицерина. Препарат накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом (не менее 2 препаратов).
Метод Шульмана (нативный препарат) имеет определенные преимущества. С помощью этого метода можно определять яйца и личинки некоторых гельминтов. Для этого в стеклянный сосуд с водой или физиологическим раствором хлорида натрия (150 мл) погружают 3 г фекалий. Стеклянной палочкой размешивают содержимое сосуда, в результате чего в центре, у палочки, образуется воронковидное углубление. Быстро извлекают палочку и оставшуюся в ней каплю жидкости наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом, определяя яйца гельминтов и личинки.
Метод соскоба применяют для диагностики энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза. Пользуются отточенной в виде шпателя спичкой, заостренный конец которой смочен в 1% растворе соды. Содержимое шпателя переносят на предметное стекло в каплю 1% раствора бикарбоната натрия. Сверху каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом.
Метод Фюллеборна позволяет концентрировать яйца гельминтов для исследования, и поэтому вероятность обнаружения их этим способом увеличивается. Готовят раствор хлорида натрия - 350 г на 1 л воды, нагревают до кипения и фильтруют через слой ваты или марли. В фарфоровый стаканчик на 100 мл вносят 5- 10 г кала и постепенно разбавляют насыщенным раствором натрия хлорида. Клетчатку, которая всплывает, немедленно удаляют фильтровальной бумагой. Стаканчик с содержимым оставляют в вытяжном шкафу на 30 мин -1ч, на поверхности образуется пленка, в которой находятся яйца гельминтов, всплывшие в гипертоническом растворе. Проволочкой или платиновой петлей снимают пленку, наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. Методом Фюллеборна хорошо определяют яйца всех круглых гельминтов, кроме неоплодотворенных яиц аскарид, и карликового цепня. Яйца сосальщиков и крупных ленточных гельминтов всплывают плохо, поэтому целесообразно просматривать 2-4 препарата со дна сосуда.
Для накопления яиц по методу Телеманна необходимы эфир и соляная кислота. В пробирку наливают 1-1,5 мл эфира и 5-6 мл разведенной соляной кислоты, к раствору. добавляют небольшую часть экскрементов (1-2 г), взбалтывают, процеживают через густое ситечко в фарфоровую чашечку, сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1 мин. В пробирке образуется три слоя: верхний содержит экстрагированные жиры, средний - соляную кислоту, в которой растворились белковые вещества, и нижний - нерастворенные частицы и яйца гельминтов. Два верхних слоя сливают и из осадка готовят 1-2 препарата, которые рассматривают под микроскопом. Недостатком метода является вредное действие соляной кислоты на оптическую систему микроскопа и деформирующее влияние ее на яйца гельминтов.
По способу Калантаря н 5 г фекалий размешивают в 10-кратном объеме насыщенного раствора нитрата натрия. Полученную эмульсию процеживают через редкую марлю. Через 10 мин готовят 5-6 препаратов из пленки с поверхности жидкости и исследуют их под микроскопом.
При описторхозе для определения интенсивности инвазии и эффективности проведенной терапии применяют метод количественного определения яиц в кале по Столлу. С этой целью в специальную стеклянную колбочку наливают 56 мл децинормального раствора едкого натра. Добавляют 4 г кала (до уровня жидкости в колбочке 60 мл) и взбалтывают со стеклянными бусами. Для исследования пипеткой набирают 0,075 мл (0,005 г) смеси, перенося на предметное стекло, накрывают покровным стеклом (22 х 23 мм) и под микроскопом считают количество яиц (содержащихся в 0,075 см3 смеси). Полученное число умножают на 200, в результате получают число яиц в 1 г кала. Ниже приводим краткую характеристику яиц гельминтов.
Оплодотворенное яйцо аскариды овальной формы с толстой многослойной оболочкой. Наружная белковая оболочка крупнобугристая, окрашена в темно-желтый цвет. Внутри яйца шаровидный бластомер. Размеры яйца 50-70х40-50 мкм. Неоплодотворенное яйцо аскарид удлиненной формы, белковая оболочка тонкая, мелкобугристая, желтого цвета. Внутри яйца крупные полигональные желтые клетки. Размеры 50-100х40- 50 мкм. Иногда яйца могут быть без белковой оболочки - прозрачные, бесцветные и покрыты ровной толстой оболочкой (рис. 20, 1, 2, 3).
Яйца власоглава овальной формы с толстой многослойной оболочкой золотисто-желтого или коричневого цвета. На полюсах - пробковидные образования. Внутри яйца - мелкозернистое содержимое. Размеры 50- 54х22-23 мкм (рис. 20, 4).
Яйца острицы неправильной овальной формы с тонкой гладкой бесцветной многослойной оболочкой. Одна сторона уплощена, другая - выпукла. Внутри яйца - зародыш на разной степени развития, вплоть до личинки. Размеры 50-60х20-30 мкм (рис. 20, 5).
Яйца анкилостом правильной овальной формы с тонкой прозрачной бесцветной оболочкой. Внутри свежевы-деленных яиц - 4 бластомера. Размеры 54-70х36- 40 мкм (рис. 20,6).
Яйца бычьего и свиного цепня одинакового строения, шаровидной формы; оболочка с 1-2 нитями. Внутри яйца онкосфера (зародыш) с толстой радиально исчерченной оболочкой темно-коричневого цвета, с шестью эмбриональными крючочками внутри. Размеры онкосферы 31х40 мкм. В испражнениях человека встречаются не яйца, а онкосферы (рис. 20, 7).
Яйца карликового цепня овальной формы, имеют тонкую бесцветную оболочку с лимоноподобной онкосферой внутри, от полюсов которой отходят длинные нитевидные придатки (филаменты). Размеры 40х50 мкм. В онкосфере 6 зародышевых крючечков (рис. 20,8).
Яйца широкого лентеца яйцевидной формы с толстой гладкой серого цвета оболочкой. Внутри яйца крупнозернистое содержимое, на верхнем полюсе - крышечка, на противоположном - бугорок. Размеры 68-71х45 мкм (рис. 20, 9).
Яйца кошачьей двуустки имеют тонкую гладкую оболочку бледно-желтого цвета с крышечкой на верхнем полюсе и шипиком на противоположном. Нижняя половина яйца расширена, внутреннее содержимое яйца мелкозернистое. Размеры 26-32X11-15 мкм.
Для обнаружения личинок анкилостомы, угрицы кишечной пользуются методом Бермана. 5 г фекалий на металлическом ситечке помещают над стеклянной воронкой, прикрепленной к штативу. На носик воронки одевают резиновую трубку с зажимом. В воронку наливают нагретую До 50° С воду так, чтобы нижняя часть ситечка с фекалиями была приближена к воде. Личинки активно переходят из кала в воду, скопляясь в нижней части резиновой трубки. Через 2 ч медленно открывают зажим, спускают воду с личинками в центрифужные пробирки, центрифугируют, из осадка на предметном стекле готовят препараты, которые рассматривают под покровным стеклом.
Для определения в крови личинок трихинелл взятую из вены кровь гемолизируют дистиллированной водой, центрифугируют и из осадка готовят препараты, которые исследуют под микроскопом.
Исследование дуоденального содержимого проводят так: желчь смешивают с равным объемом этилового эфира, центрифугируют; осадок микроскопируют. Кроме осадка, исследуют плавающие в жидкости хлопья, в которых могут быть яйца гельминтов.
При цистицеркозе и трихинеллезе исследуют также ткани. Кусочек биопсированной ткани - мышцы подкожной клетчатки, кожи - осматривают сначала невооруженным глазом для определения пузырька-цистицерка, длина которого 6-20 мм, ширина - 5-10 мм. При подозрении на цистицерк пузырек раздавливают между двумя предметными стеклами и рассматривают под микроскопом. Для цистицеркоза характерно наличие сколекса с четырьмя присосками и венчиком крючьев.
Чтобы обнаружить трихинеллы, асептически вырезанный кусочек мышцы (икроножной и др.) измельчают в 50% растворе глицерина на тонкие волоконца с помощью препаровальных игл. Эти волоконца сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Личинки трихинелл свернуты в мышцах в виде спирали и находятся в капсулах (рис. 21).
Рентгенологический метод исследования применяют при эхинококкозе, циетицеркозе, трихинеллезе (после обызвествления личинок) и аскаридозе.
В ряде случаев используют иммунологические методы диагностики.
Гельминты, а также продукты их жизнедеятельности обладают антигенными свойствами для организма человека. В результате пребывания гельминтов в организме человека происходит аллергическая перестройка, которая может быть выявлена специальными внутрикожными аллергическими пробами. Кроме того, в организме инвазированных образуются различные антитела - комплементсвязывающие преципитины. Методы иммунодиагностики приобретают особую ценность в тех случаях, когда не может быть использована овоскопия, в частности при трихинеллезе, эхинококкозе, цистицеркозе, аскаридозе в миграционной стадии и при инвазии только мужскими особями.
При эхинококкозе и трихинеллезе ставят реакцию латекс-агглютинации, Калюса, цистицеркозе - пробу с антигеном, приготовленным Бобровым и Возной. При некоторых гельминтозах возможно применение серологических исследований: реакция преципитации личинок аскарид с сывороткой крови больного в миграционной стадии аскаридоза, реакция преципитации сыворотки крови больного трихинеллезом с антигеном из личинок трихинелл, РСК при эхинококкозе, трихинеллезе, описторхозе, цистицеркозе.
Испражнения исследуются двумя методами:
1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.
При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.
2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.
Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.
1. Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.
2. Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO 3 (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.
3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.
4. Метод закручивания по Шульману – для обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.
5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.
6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 28 0 С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 60 0 . Лаборант должен работать в перчатках.
7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.
а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.
б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)
Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.
в) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.
Исследование крови, желчи, мокроты и мышц
Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.
Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.
Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.
Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.
Серологические методы
