Т-клетки — марионетки, или как перепрограммировать Т-лимфоциты, чтобы вылечить рак. Активность cd4 т-клеток воспаления Активированные т лимфоциты

Рецептор Т-клеток . Т-клетки распознают Аг с помощью двух типов мембранных гликопротеинов - Т-клеточных рецепторов и CD3. Т-клеточный рецептор - гетеродимер, содержащий а- и р-цепи (примерно 98% всех Т-клеток) или 5-цепи (около 1,5-2% клеток) с молекулярной массой 40-50 кД. Т-клеточный рецептор входит в суперсемейство Ig-подобных молекул клеточной поверхности, участвующих в реакциях распознавания. Механизмы трансмембранной передачи с рецептора Т-клетки остаются неизвестными; предположительно они обусловлены CD3, нековалентно связанными с рецепторами Т-лимфоцитов.

Активация Т-клеток

Для активации Т-клеток необходимо два сигнала от макрофагов. Первый сигнал - представление Аг, второй- секреция активирующего фактора (ИЛ-1). Последний стимулирует синтез Т-лимфоцитами ИЛ-2, активирующего эти клетки (аутокринная регуляция). Одновременно на мембранах Т-клеток повышается экспрессия рецепторов к ИЛ-2 (CD25).

Субпопуляции Т-лимфоцитов

На основании поверхностных маркёров различают несколько субпопуляций Т-лимфоцитов , выполняющих различные функции. Для дифференцировки Т-клеток применяют набор моноклональных AT, выявляющих поверхностные маркерные CD-Aг [от англ. cluster of differentiation, кластер дифференцировки]. Все зрелые Т-клетки экспрессируют поверхностный CD3-Aг; помимо него субпопуляции Т-лимфоцитов также экспрессируют и другие CD-Aг.

СD4 + лимфоциты

Мембранные молекулы CD4 несут различные популяции клеток, условно разделяемые на регуляторные (хелперы) и эффекторные (Т гзт).

Т-хелперы [от англ. to help, помогать] специфически распознают Аг и взаимодействуют с макрофагами и В-клетками в ходе индукции гуморального иммунного ответа. Отношение CD4 + /CD8 + -клеток - важный параметр оценки иммунного статуса; в нормальных условиях отношение CD4 + /CD8 + приблизительно равно двум и отражает доминирующее влияние на иммунный ответ стимулирующих факторов. При некоторых иммунодефицитных состояниях отношение обратное (менее I, то есть СD8 + -клетки доминируют), указывая на преимущественное влияние иммуносупрессорных эффектов; лежит в основе патогенеза многих иммунодефицитов (например, СПИДа).

Аг распознающие Т-лимфоциты «узнают» чужеродный эпитоп вирусного или опухолевого Аг в комплексе с молекулой МНС на плазматической мембране клетки-мишени. Т гзт [Т-эффекторы реакций гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)] опосредуют реакции ГЗТ.

В отличие от В-системы иммунитета, которая нейтрализует антиген посредством гуморальных факторов (антител), Т-система иммунитета непосредственно уничтожает антигены , представленные на клетках, через прямое взаимодействие своих определенных эффекторных форм Т-лимфоцитов с чужеродными или измененными собственными клетками. ПричемТ-лимфоциты , в отличие от В-лимфоцитов,распознают не нативные антигены, а какие-то их фрагменты (антигенные детерминанты),ассоциированные с собственными молекулами организма (молекулами МНСIилиIIклассов) и представленные на поверхностиантигенпрезентирующих клеток – макрофагов, дендритных клеток, В-лимфоцитов. Макрофаги не имеют гистологически определенного места локализации и широко представлены не только во всей лимфоидной ткани, но и в рыхлой волокнистой соединительной ткани большинства полых и неполых органов. Дендритные клетки типичны для лимфоидной ткани лимфатических узлов, лимфоидных фолликулов и селезенки. В-лимфоциты концентрируются в неинкапсулированных лимфоидных фолликулах соединительной ткани, лимфоидных фолликулах лимфатических узлов и белой пульпы селезенки, а также диффузно встречаются в рыхлой волокнистой соединительной ткани органов. Функция антигенпрезентирующих клеток заключается в придании антигенуиммуногенных свойств с целью последующего его распознавания Т-лимфоцитами. В частности, антиген первоначально фагоцитируется антигенпредставляющей клеткой или проникает в нее путем пиноцитоза, после чего подвергается предварительной обработке (расщеплению) ее ферментами (ферментами лизосом в случае фагоцитоза антигенного материала или ферментами протеосомного комплекса цитоплазмы в случае пиноцитоза), а затем в комплексе с собственными молекулами МНС представляется на поверхности антигенпрезентирующей клетки.

Первичное распознавание предварительно обработанного макрофагами антигена осуществляется функционально незрелыми, наивными Т-лимфоцитами , для которых, во-первых, уже характернаспецифичность (они имеют антигенраспознающий рецептор, характеризующийся определенной пространственной структурой и способный вступать в контакт со строго определенной антигенной детерминантой), а, во-вторых, внутритимусная дифференцировка Т-лимфоцитов уже обусловила их определенные свойства, а, следовательно, ипринадлежность к определенной субпопуляции Т-лимфоцитов (CD4- илиCD8 Т-клетки). Созревание наивных Т-лимфоцитов в зрелые, функционально активные (армированные), Т-клетки происходит в периферических органах иммунной системы. В частности, антигены, проникшие через кожу и слизистые оболочки, попадают в лимфоидные фолликулы соединительной ткани, а затем с током лимфы могут быть занесены в ближайшие лимфатические узлы. Если же антиген оказывается в кровотоке, то он, как правило, накапливается в селезенке.

Оказавшийся в лимфоидной ткани антиген провоцирует усиление рециркуляции лимфоцитов. При этом огромное количество наивных лимфоцитов, поступающих с током крови, а в лимфатический узел – и с током лимфы, в лимфоидную ткань, покидает ее, поскольку не проявляет специфичности в отношении находящихся там антигенов, в связи с чем не образует прочных контактов с макрофагами и дендритными клетками и возвращается в циркуляцию. И только очень малая доля приносимых в лимфоидную ткань лимфоцитов оказывается способной к специфическому взаимодействию с антигенными детерминантами, фиксированными на поверхности антигенпрезентирующих клеток, вступает в прочные связи с ними, подвергается антигензависимой активации и превращается в зрелые эффекторные клетки. Так, только 1 из 10 5 наивных Т-лимфоцитов, проникающих в лимфатический узел, оказывается способным к специфическому взаимодействию и начинает активироваться после контакта с антигенной детерминантой, остальные же наивные Т-лимфоциты покидают лимфатический узел и продолжают циркулировать по организму в поисках своих специфических антигенов.

Проникновению лимфоцитов в периферические ткани, в том числе лимфоидную ткань, способствуют определенные рецепторы на поверхности эндотелиальных клеток сосудов, плотность которых особенно велика в эндотелии венул лимфоидной ткани. Благодаря этим рецепторам на уровне венул происходит взаимодействие определенных рецепторов лимфоцитов с соответствующими рецепторами эндотелия венул, что обуславливает резкое замедление движения лимфоцитов по венулам, их пристеночное расположение и облегчает последующий переход в окружающие ткани. После проникновения лимфоцитов из сосудистого русла в лимфоидную или рыхлую волокнистую соединительную ткань они начинают не специфически благодаря определенным своим рецепторам (LFA-1) вступать во взаимодействие с рецепторами макрофагов (ICAM-рецепторы), что обеспечивает некоторую задержку лимфоцитов у поверхности антигенпрезентирующих клеток. Однако, если на поверхности макрофагов в составе комплексов с молекулами МНС отсутствуют специфичные по отношению к антигенраспознающему рецептору Т-лимфоцита антигенные детерминанты, то его взаимодействие с макрофагом не приводит к активации Т-лимфоцита и является очень непродолжительным (Т-лимфоцит на очень короткий промежуток времени задерживается у поверхности макрофага, а затем покидает его и вступает во взаимодействие с другими макрофагами). В случае же, когда на поверхности макрофага имеется определенная антигенная детерминанта, стерически соответствующая антигенраспознающему рецептору присоединившегося к макрофагу Т-лимфоцита, между этими клетками возникает прочная связь в силу следующих причин:

во-первых, благодаря взаимодействию антигенраспознающего Т-клеточного рецептора с антигенной детерминантой на поверхности макрофага,

а во-вторых, вследствие повышения сродства LFA-1 Т-лимфоцита к ICAM-рецептору макрофага под действием образующегося комплекса "антигенраспознающий Т-клеточный рецептор - антигенная детерминанта".

Сам процесс распознавания Т-лимфоцитом комплекса "антигенная детерминанта - молекула МНС", представленного на поверхности макрофага, является обязательным, но недостаточным, условием для инициации развития наивных Т-клеток в зрелые эффекторы, поскольку для запуска антигензависимого лимфоцитопоэза Т-лимфоцитов необходимо также включение специальных кофакторов (костимуляторов). Именно антигенпрезентирующие клетки имеют такие кофакторы в составе своей плазматической мембраны. В частности, связывание антигенраспознающего рецептора Т-лимфоцитов с комплексом"антигенная детерминанта - молекула МНС I или II класса" , фиксированном на поверхности макрофага, и последующее включение в комплексообразованиекорецепторов CD 4 илиCD 8 Т-лимфоцитов обеспечивает лишь одно из условий развития наивных Т-клеток – формированиепервого сигнала к пролиферации и дифференцировке этих клеток. Для того чтобы наивная Т-клетка начала процесс дальнейшего развития, необходимвторой сигнал от ее клеточной поверхности к геному. Костимулятором этого второго сигнала выступает молекулаВ7 , экспрессирующаяся на поверхности антигенпрезентирующих клеток. Костимулятор В7 представляет собой белок, являющийся гомодимером и способный взаимодействовать с белкомCD 28 , который экспрессируется на поверхности наивной Т-клетки. Взаимодействие между молекулами В7 макрофага иCD28 наивного Т-лимфоцита, которое становится возможным только после взаимодействия антигенраспознающего рецептора Т-лимфоцита с антигенной детерминантой, представленной на поверхности макрофага, обеспечивает формирование второго сигнала, являющегося необходимым условием для стимуляции деления и дифференцировки наивных Т-лимфоцитов до функционально зрелых форм. Процесс взаимодействия между молекулами В7 иCD28 усиливается белком CTLA-4 Т-лимфоцитов, обладающим высоким сродством к молекуле В7. МолекулыCD28 и CTLA-4 Т-лимфоцитов характеризуются очень высокой гомологией по последовательности аминокислотных остатков, а кодирующие их гены близко сцеплены в хромосоме. Таким образом, одна и та же антигенпрезентирующая клетка выполняет двоякую функцию в иммунном ответе. С одной стороны, она представляет антиген в иммунногенной форме Т-лимфоцитам, а с другой – экспрессирует определенные белки для костимуляции превращения наивных Т-клеток в зрелые эффекторные формы.

Показано, что процесс созревания наивных Т-лимфоцитов происходит под влиянием интерлейкина-2 (главного митогенного фактора лимфоцитов, стимулирующего процесс их пролиферации), синтезируемого самим Т-лимфоцитом после двойной его стимуляции. Так, распознавание антигенной детерминанты Т-клеточным рецептором индуцирует в наивной Т-клетке несколько транскрипционных факторов, одним из которых является ядерный фактор активации (англ. сокр.NF-AT). Этот транскрипционный фактор взаимодействует с промотором гена, кодирующего интерлейкин-2, инициируя транскрипцию этого гена. Однако дерепрессия гена, кодирующего интерлейкин-2, под влиянием одного лишь ядерного фактора активации не приводит к активной продукции этого цитокина, поскольку мРНК, кодирующая интерлейкин-2 является очень нестабильной. Для полноценного синтеза интерлейкина-2 необходимо также образование комплексаCD28-В7, сигнал от которого стабилизирует мРНК интерлейкина-2, в результате чего синтез этого цитокина возрастает в 20-30 раз. Если же распознавание антигенной детерминанты Т-лимфоцитами происходит в отсутствии костимулирующего сигнала отCD28-В7, то продукция интерлейкина-2 оказывается крайне низкой, и наивные Т-лимфоциты не могут пройти нормальное созревание и адекватно ответить на антиген.

Кроме стимуляции синтеза интерлейкина-2 в Т-лимфоцитах после их двусигнальной активации, имеет место иусиление синтеза и экспрессии на поверхности Т-лимфоцита рецепторов к этому цитокину . Интерлейкин-2, взаимодействуя с собственными рецепторами на поверхности активированных Т-лимфоцитов, стимулирует быстрое их размножение и последующую дифференцировку в зрелые эффекторные клетки.

В пользу участия интерлейкина-2 в созревании Т-лимфоцитов свидетельствует и факт ингибирования этого процесса циклоспорином А, подавляющим продукцию интерлейкина-2. Данный препарат используют в клинической практике с целью предупреждения отторжения трансплантата.

Следовательно, сложный процесс активации наивных Т-лимфоцитов после их взаимодействия с соответствующими антигенными детерминантами, расположенными на антигенпрезентирующих клетках, требует обязательного участия специальных костимулятров, присутствующих только на поверхности антгенпредставляющих клеток, что, очевидно, повышает надежность иммунологической толерантности. В частности, отрицательная селекция "запрещенных" клонов Т-лимфоцитов в тимусе, настроенных на собственные молекулы, не является абсолютно безошибочной. Определенные "запрещенные" клоны могут выйти в циркуляцию и стать потенциальной угрозой дальнейшей аутоиммунной агрессии. Однако, как правило, этой агрессии не наблюдается, поскольку сам факт распознавания антигена Т-лимфоцитами, не является единственным достаточным условием запуска дифференцировки наивных Т-лимфоцитов; необходимо также обязательное участие костимулятора, присутствующего только на антигенпрезентирующих клетках и отсутствующего в мембране других клеток организма.

Активация наивных Т-клеток при первичной их встрече с соответствующим определенным антигеном носит название примирования . В результате такой антигензависимой активации предсуществующих в организме определенных клонов Т-лимфоцитов, коммитированных на данный антиген, появляются функционально зрелые Т-клетки, которые начинают взаимодействовать с этим антигеном, проявляя свое функциональное предназначение. В ряде случаев, в частности, при формировании специфической цитотоксической реакции, обеспечиваемой Т-киллерами, антигенпрезентирующая клетка может выступать и как объект распознавания, и как объект цитолитического действия Т-киллеров.

Взаимодействие наивных Т-лимфоцитов с соответствующей по специфичности антигенной детерминантой и костимулятором В7, представленными на поверхности антигенпрезентирующей клетки, инициирует полноценный синтез и секрецию интерлейкина 2, который аутокринным способом стимулирует наивные Т-клетки к пролиферации и дифференцировке. По окончании пролиферативной фазы Т-лимфоцитов, длящейся 4-5 дней, они дифференцируются в зрелые эффекторные Т-лимфоциты, которые способны синтезировать все белки, необходимые для выполнения специализированных функций. В результате дифференцировки наивных Т-лимфоцитов в зрелые эффекторные клетки они приобретают способность непосредственно действовать на чужеродные клетки без использования каких-либо костимуляторов благодаря количественному и качественному изменению состава молекул на своей поверхности. Во-первых, завершившие дифференцировку Т-лимфоциты характеризуются усилением экспрессии на своей поверхности молекул LFA -1 иCD 2 , которые обеспечивают более эффективное их взаимодействие с адгезивными молекуламиICAMиLFA-3, обильно представленными на поверхности антигенпрезентирующих клеток (в то же время на поверхности большинства других клеток организма выраженность таких адгезивных молекул очень низкая). Такое усиление эксперсии молекулLFA-1 иCD2 особенно важно для цитотоксических Т-лимфоцитов, нуждающихся для проявления своей активности в непосредственном контакте с клетками-мишенями (носителями антигенных детерминант). Во-вторых, в результате антигензависимой активации Т-лимфоцитов определенные изменения происходят и в самом Т-клеточном рецепторе. В частности, активированная антигенраспознающим Т-клеточным комплексом тирозинспецифическая фосфатаза (CD45) связывает Т-клеточный рецептор с корецепторамиCD4 илиCD8, что обеспечивает эффективное прохождение сигнала от антигенраспознающего комплекса Т-лимфоцита внутрь клетки. В-третьих, зрелые эффекторные Т-лимфоциты теряют на своей поверхностиL-селектин, который был необходим наивным формам лимфоцитов для заселения периферических лимфоидных органов, но который оказывается не нужным и даже вредным при развитии иммунного ответа. В частности,L-селектин мешает миграции и концентрации зрелых Т-лимфоцитов в зоне проникновения патогена в связи с тем, что способствует их прохождению в любые периферические лимфоидные органы, а не строго в зону специфического патогена. При этом вместоL-селектина наивных Т-лимфоцитов в зрелых эффекторных клетках экспрессируется адгезинVLA-4, который позволяет им связываться с сосудами в именно зоне воспаления (с т.н.активированными сосудами , в эндотелии которых появляется специфичный кVLA-4 адгезинVCAM-1), проникать в эту зону и выполнять там свою антигеннейтрализующую функцию.

Активированные лимфоциты в анализе - это группа кровяных телец белого цвета. Их число будет определено после проведения специального обследования в лаборатории. При рассмотрении результатов анализа пациенты чаще всего не понимают значения многих записей. Для врача же такие показатели и обозначения станут источником всей информации о здоровье пациента. Часто происходит так, что человек по увиденным данным самостоятельно оценивает свое состояние и ставит себе неправильный прогноз. Важно определить, что значат активированные лимфоциты и почему они появляются в организме.

Для чего нужны лимфоциты в организме?

Белые кровяные тельца бывают двух видов, один из них и является лимфоцитами. Они вырабатываются иммунной системой человека. Их главная задача заключена в том, чтобы своевременно определить вирус либо инфекционный процесс в организме. Такие тельца отвечают за выявление вредных веществ и активную борьбу с ними. Они могут быть двух видов:

• Т-клетки;
• В-клетки.

В-клетки приводят к выработке антител, а Т-клетки уничтожают инородные тела в организме. Также существуют атипичные лимфоциты, которые также принято называть нулевыми.

Чтобы активировать работу телец, клетка получает специальную информацию. За количество вырабатываемых в организме лимфоцитов несет ответственность костный мозг. Многие думают, что лимфоциты перемещаются по организму человека и борются с инфекцией, уничтожая ее. Но в действительности все совсем не так. Кровь, находящаяся внутри сосудов, включает в себя всего 2 процента лимфоцитов от всех находящихся в организме человека. Все остальное количество приходится на лимфоузлы.

Количество лимфоцитов у взрослого

В организме человека находится следующее количество лимфоцитов:

• белые тельца в крови взрослого человека составляют 40 процентов;
• значительно отличается уровень лимфоцитов у женщин и у мужчин;
• также на число таких клеток напрямую воздействует гормональный фон, который сильно изменяется у женщины во время менструации либо во время вынашивания плода. В этот промежуток времени число лимфоцитов может возрасти до 50% и больше.

При проведении обследования активированных лимфоцитов в анализе в лаборатории и при выявлении отклонений врач назначает дополнительные процедуры. Это может быть диагностика на генном уровне, которая поможет определить точную причину заболевания.

Важно проводить обследование на наличие активированных лимфоцитов в организме в том случае, если ранее человек переболел опасным заболеванием. По результатам диагностики можно точно определить общее состояние здоровья человека и назначить эффективное и комплексное лечение.

У детей число кровяных телец в крови сильно меняется на разном этапе взросления. С возраста 5 лет начинается процесс нормализации количества лимфоцитов.

Если врач обнаружил сильное отклонение от установленной нормы, то он устанавливает диагноз лимфоцитоз. При таком поражении важно выяснить его первопричину появления. Если в организме человека будет найдена инфекция, то повышение лимфоцитов в крови можно объяснить их активным воздействием на вредоносные микроорганизмы.

После полного восстановления организма человека и устранения симптомов заболевания, количество кровяных телец восстанавливается в течение последующих нескольких месяцев. Чтобы исключить либо определить наличие злокачественного образования в организме назначают сбор крови на биохимию.

Повышенный уровень лимфоцитов

При увеличении числа лимфоцитов в организме у человека возникают характерные симптомы заболевания. О повышенном количестве кровяных телец узнают, как правило, после диагностики инфекции в организме. Абсолютным лимфоцитозом врачи называют резкое увеличение числа клеток. Такая реакция возникает в большинстве случаев в ответ на борьбу с вирусом. При этом кровяные тельца будут устранять другие клетки, в результате чего их количество увеличится.

Спровоцировать такой процесс могут:

• любые вирусы в организме человека;
• аллергия;
• хронические заболевания острого характера;
• курсовой прием медикаментозных средств.

При проведении анализа в этот промежуток времени результат будет показывать значительное отхождение от нормы. При проведении эффективного и комплексного лечения такое состояние можно быстро устранить.

В детском возрасте увеличение числа белых кровяных телец в организме провоцируют различные вирусы.

Активирование лимфоцитов

В организме человека начинается активная выработка иммунитета к следующим заболеваниям:

• ветрянка;
• краснуха;
• корь.

Активированные лимфоциты в крови могут быть признаком развивающейся простуды. При восстановлении организма и устранении заболевания уровень лимфоцитов должен в ближайшее время нормализоваться. Если такого не происходит, то важно незамедлительно записаться на прием к врачу. Он назначит проведение комплексной диагностики и поможет выявить причину такого состояния. В некоторых случаях врач выписывает направление к онкологу.

Пониженный уровень

Недостаточное количество лимфоцитов врачи называют лимфоцитопенией. При таком процессе значительно уменьшается количество этих клеток по отношению ко всем лейкоцитам в организме. Такое состояние будет напрямую зависеть от вида инфекции. Лимфопения считается абсолютной в том случае, если костный мозг перестает вырабатывать нужное количество иммунных клеток.

Чаще всего у взрослого человека такой процесс развивается на фоне простуды. В этом случае иммунные клетки в организме активно борются с инфекцией, а новые не вырабатываются в нужном количестве. Именно по такому принципу и развивается нехватка лейкоцитов у человека с диагнозом ВИЧ.

Причины недостатка лимфоцитов

Недостаточное их количество в организме человека диагностируется в следующих случаях:

• беременность;
• анемия;
• при приеме кортикостероидов;
• заболевания эндокринной системы;
• при образовании в организме доброкачественных и злокачественных процессов;
• после длительного курса химиотерапии.

Количество активированных лимфоцитов в анализе крови может сильно меняться. При этом важно восстановить его и следить за всеми изменениями в состоянии. Современные методы обследования помогают своевременно выявить проблемы со здоровьем человека и начать комплексное лечение, направленное на восстановление уровня лимфоцитов.

Первичную причину появления заболевания может определить исключительно лечащий специалист. Не следует пытаться самостоятельно восстановить количество белых телец в организме, так как таким способом можно только ухудшить общее состояние и спровоцировать осложнения.

Для тщательного изучения числа активированных лимфоцитов врач назначает расширенное иммунологическое обследование. Оно проводится на протяжении нескольких дней. Для него должны иметься четкие показания. К примеру, врач может столкнуться с ситуацией, когда простуда никак не проявляет себя и кажется, что ребенок здоров.

В этом случае специалист обращает особое внимание на следующие симптомы:

• несильные покашливания у ребенка;
• заложенность носа;
• капризное поведение, недомогание, сильная усталость.

В этом случае следует пройти дополнительное обследование на активированные лимфоциты у ребенка, даже если поражение не провоцирует никаких неприятных симптомов.

Лечение поражения

Для начала, важно избавиться от причины появления заболевания. Если проблема будет устранена, то количество лимфоцитов в организме придет в норму без оказания какой-либо помощи. Если же организм человека даст обратную реакцию и количество кровяных телец не будет восстановлено, то ребенку может понадобиться проведение оперативного вмешательства с целью пересадки стволовых клеток.

Назначить операцию могут два специалиста:

• иммунолог;
• гематолог.

Если врач определил повышенное содержание лимфоцитов в организме пациента, а также у него проявляется сильная потливость, повышена температура тела, присутствует общее недомогание, то важно провести дополнительное исследование.

Лимфоциты - белые кровяные клетки, которые отвечают за поддержание иммунной защиты организма. Отклонения в их содержании в организме могут говорить о наличии у пациента опасных болезней (к примеру, онкологии), которые важно как можно скорее выявить и начать лечить.

Основные причины повышения лимфоцитов у детей

Распространенные причины увеличения активированных лимфоцитов в крови у ребенка:

• инфекционные болезни (опоясывающий лишай, малярия, оспа, корь, вирусные заболевания);
• язвенный колит;
• бронхиальная астма;
• анемия;
• лейкоз;
• гиперплазия тимуса;
• гиперфункция костного мозга;
• лейкоз острого и хронического характера.

Дети: норма белых телец

В зависимости от возраста, нормы активированных лимфоцитов в анализе у ребенка сильно отличаются:

• У грудничка - от 14 до 32%.
• От одной недели до нескольких месяцев - от 21 до 48%.
• От одного до шести месяцев - 42-67%.
• До одного года - 40-62%.
• От 1 до 3 лет - 32-34%.
• До возраста 5 лет - 30-52%.
• До 13 лет - от 27 до 48 %.

Активированные лимфоциты повышены у ребенка из-за заболеваний в организме. Не следует пытаться самостоятельно выявить причину такого состояния и заниматься самолечением ребенка. Расшифровка результатов анализов осуществляется исключительно лечащим врачом.

Подготовка к сдаче анализов

Анализ для определения количества активированных лимфоцитов считается одним из самых углубленных. Чаще всего его назначают тем больным, в организме которых распространяется патологический процесс, отличающийся вирусным либо инфекционным характером. Иногда провести такой анализ важно для выявления эффективности лечения пациента.

Подготовка к процедуре довольно простая, но, вместе с этим, ответственная. Чем точнее будут соблюдены советы врача, тем правильнее и точнее будет результат расшифровки обследования.

Сдать анализ крови на определение уровня активных лимфоцитов можно в любой клинике в утреннее время, но некоторые лаборатории работают и до обеда.

Подготавливаться к проведению сдачи крови важно за три либо четыре дня до похода в лабораторию. На протяжении этого времени важно исключить сильное физическое перенапряжение (и другие изнуряющие организм нагрузки).

Помимо этого, на протяжении указанного времени важно прекратить прием медикаментозных препаратов (если ранее они использовались). Перед проведением анализа можно употреблять только важные лекарственные препараты, обговорив их прием предварительно с врачом.

Особых ограничений в питании нет. На протяжении подготовки к сдаче анализов можно употреблять любые привычные продукты.

За восемь-десять часов до начала процедуры запрещено употреблять пищу, а чтобы перенести голод (сделать это проще, когда человек спит), сдача анализов назначается на утренние часы. На протяжении этого отрезка времени можно пить воду, но не следует ею злоупотреблять в большом количестве.

Следует отметить, что употреблять разрешено только кипяченую либо бутилированную воду, от соков, чая, кофе и минеральных напитков следует отказаться.

Получение результатов

В современных клиниках результаты данного анализа можно получить уже по прошествии пары часов (в некоторых случаях через день) с момента сдачи крови. Чаще всего в государственных поликлиниках расшифровка исследования перенаправляется прямо в кабинет лечащего врача, который назначил сдачу крови пациенту.

Под активацией клеток понимают их переход из состояния покоя в функционально активное состояние - макрофаги продуцируют активные формы кислорода, тучные клетки выбрасывают гранулы, мышечные клетки сокращаются и т.д. В случае лимфоцита активация также означает выход из состояния покоя (G0), но в несколько ином смысле: покоящийся лимфоцит находится вне клеточного цикла, а его активация означает вступление в цикл. Это последствие активации лимфоцитов глубоко функционально, поскольку любому проявлению функции лимфоцитов должно предшествовать их размножение (поскольку исходная численности клеток в каждом клоне мала). Это не относится к естественным киллерам - лимфоцитам, популяция которых не имеет клональной структуры. Активация NK-клеток не связана с пролиферацией и означает переход в состояние готовности выполнять цитотоксическую функцию.
Молекулярные основы активации Т-клеток
Активация клеток, в том числе лимфоцитов, всегда сопряжена с экспрессией многих генов. В случае лимфоцитов активация должна приводить прежде всего к экспрессии генов, обеспечивающих пролиферативную экспансию клона. Суть подготовки Т-клеток к пролиферации состоит прежде всего в экспрессии генов аутокринного ростового фактора - IL-2 и его рецептора, а точнее a-цепи этого рецептора, обеспечивающей достижение необходимого уровня сродства к цитокину, что служит условием выполнения рецептором его функций. Оба эти гена являются индуцибельными, т.е. в покоящемся состоянии они выключены, но экспрессируются в ответ на индуцирующее воздействие. Сигнал к включению гена поступает из его регуляторного (промоторного) участка, в котором расположены сайты специфического взаимодействия с определенными белками - транскрипционными факторами. Некоторые их таких белков исходно представлены в клетке в активной форме, но большинство отсутствует и может быть синтезировано de novo или активировано путем фосфорилирования или удаления ингибирующей субъединицы. Таким образом, молекулярная основа активации - образование необходимых транскрипционных факторов, обеспечивающих включение индуцибельных генов.
На Т-лимфоциты активирующее воздействие оказывают индукторы активации. В физиологических условиях таким индуктором служит антигенный стимул. Само по себе распознавание антигена при контакте Т-хел- пера с АПК не может повлиять на активность гена в силу пространственной разобщенности мембранного рецептора и генов, локализующихся в ядре. TCR проникает внутрь клетки после связывания с антигеном, но не для того, чтобы мигрировать в ядро и повлиять на активность гена, а для того, чтобы быть расщепленным. Однако при связывании антигенного комплекса с TCR в сочетании с костимулирующим воздействием возникает сигнал, достигающий ядра и регулирующий экспрессию генов. Передача сигнала осуществляется по каскадному принципу. На разных этапах передачи сигнала ее осуществляют молекулы ферментов (главным образом, протеинкиназы, активирующие белки на каждой очередной стадии передачи сигнала), а также адапторные и ГТФ-связывающие белки. Сигнал исходно является двойственным, поскольку его передача осуществляется одновременно от TCR и CD28. Затем эти пути пересекаются и вновь разделяются на несколько ветвей. Конечный результат передачи сигнала по каждому сигнальному пути - формирование транскрипционного фактора. На рис. 3.90 представлена типовая схема внутриклеточной передачи сигнала, завершающейся формированием транскрипционных факторов и активацией генов. Для активации Т-клеток требуется формирование трех транскрипционных факторов - NF-AT, NF-kB и AP-1. Далее рассмотрим осуществление внутриклеточной передачи сигнала на примере активации Т-хелперов при распознавании презентируемого дендритными клетками антигена.
Связывание комплекса MHC-II-пептид вызывает конформационные изменения молекулы TCR и связанной с ней молекулы корец ептора CD4. Пока окончательно не известно, происходит ли при этом только изменение конформации рецепторов или они олигомеризуются. Такие изменения активируют тирозинкиназы, ассоциированные с рецептором и корецеп- тором - Lck (p56lck), связанную с CD4, и Fyn (p59fyn), связанную с CD3. Указанные тирозинкиназы называют рецепторными, или проксимальными, в связи с тем, что они непосредственно примыкают к рецептору, входя в рецепторный комплекс. Обе упомянутые киназы относят к семейству Src-киназ. Киназы этого семейства содержат домены SH1, SH2 и SH3 (SH - от Src-homology) (рис. 3.91). Первый домен обладает ферментативной активностью, остальные взаимодействуют с другими киназами и адапторными белками. Функция тирозинкиназ состоит в фосфорилировании по остатку тирозина белков-мишеней, что необходимо для их активации и проявления функций, в том числе ферментативных. Мишени рецепторных киназ многочисленны. К ним относят сами молекулы Fyn и Lck (что обусловливает их аутофосфорилирование), а также полипептидные цепи TCR и другие киназы. Особенно многообразны мишени киназы Lck.
Однако первоначальным условием активации рецепторных киназ является, наоборот, их дефосфорилирование, обеспечивающее пере-

ход из гиперфосфорилированного в нормальное состояние. Дело в том, что в покоящейся клетке SH2-домен киназы Lck находится в свернутой форме вследствие фосфорилирования С-концевого остатка тирозина Y505 конститутивно активированной киназой Csk. Фосфорилированный Y505 взаимодействует с помощью фосфатной группы с остатком тирозина в Sffi-домене, к которому и подтягивается С-конец молекулы. В таком виде фермент не активен, поскольку при этом не может быть фосфори- лирован функционально важный остаток Y394 в домене SH1. Для снятия такой функциональной блокады необходимо дефосфорилирование с последующим развертыванием молекулы, что осуществляется с участием тирозинфосфатаз. Основную роль в переводе рецепторных киназ в «рабочее» состояние выполняет молекула CD45, цитоплазматический домен которой обладает активностью тирозинфосфатазы. Ранее уже упоминалось, что эта крупная молекула, препятствующая формированию тесного контакта между дендритной клеткой и Т-хелпером, вначале удаляется из зоны иммунного синапса, а затем часть молекул возвращается в эту зону для выполнения своей функции - дефосфорилирования молекул рецепторных тирозинкиназ. После того как остаток Y394 становится доступным для фосфорилирования, Lck может проявлять активность тирозинкиназы.
В генерации сигналов, передаваемых от полипептидных цепей комплекса TCR-CD3, наиболее важно наличие в цитоплазматическом участке у-, 5-, е- и Z-цепей активационной последовательности ITAM, о которой уже неоднократно упоминалось. Структура этого мотива такова: YXXI/L/ VX(6-8)YXXI/L/V (где Y - тирозин, Х - любой остаток, I/L/V - изолейцин, лейцин или валин) (рис. 3.92). Фосфорилирование остатков тирозина

Рис. 3.92. Сопоставление характеристик активационных и ингибирующих мотивов (ITAM и ITIM)

в ITAM делает этот участок доступным для распознавания аналогичными участками сигнальных молекул, расположенных более дистально. Среди полипептидных цепей TCR наиболее важна для передачи сигнала Z-цепь. В отличие от у-, 5- и е-цепей TCR, имеющих по одному участку ITAM, в цитоплазматической части Z-цепи расположены 3 последовательности ITAM, предназначенные для взаимодействия с остатками тирозина тирозинкиназы ZAP-70 (от Z-associated protein - ^-ассоциированный белок; масса 70 кДа) - ключевого фактора в передаче сигнала от TCR при его связывании с лигандом. Фосфорилирование Z-цепи является наиболее ответственным и в то же время наиболее уязвимым этапом активации Т-клеток. Полагают, что именно для обеспечения фосфорилирования всех мотивов ITAM этой молекулы необходимо длительное поддержание контакта Т-лимфоцитов и дендритных клеток. В Z-цепи покоящейся Т-клетки фосфорилирован 1 остаток тирозина; отсутствие фосфорилирования приводит к развитию апоптоза (рис. 3.93). После взаимодействия Z-цепи и ZAP-киназы запус-

Рис. 3.94. Схема сигнальных путей при активации Т-клеток. Распознавание комплекса молекулы МНС с антигенным эпитопом в сочетании с костимуляцией индуцирует запуск сигналов, передаваемых в ядро с помощью 5 каскадов, обеспечивающих формирование 3 транскрипционных факторов, необходимых для активации клетки. Жирным контуром обведены факторы, для которых показана высокая степень зависимости от костимуляции

кается полномасштабный процесс в виде нескольких параллельных путей передачи активационного сигнала (рис. 3.94).
Молекулу ZAP-70 относят к тирозинкиназам семейства Syk. Она содержит тандем из двух SH2-доменов. Условие ее взаимодействия с фцепью - предварительное фосфорилирование остатков тирозина в ITAM фцепи. После фосфорилирования 2-й остаток тирозина в мотивах ITAM фцепи взаимодействует с тирозином S^-доменов киназы ZAP-70. В результате фосфатная группа тирозина фцепи становится общей с тирозином Sffi-домена молекулы ZAP-70. За этим следует фосфорилирование остатков тирозина в ферментативном домене молекулы ZAP-70, осуществляемое тирозинкиназами Lck и, возможно, Fyn, что приводит к включению ферментативной (киназной) активности молекулы.
Дальнейшая передача сигнала обусловлена взаимодействием ZAP-70 с ее главным субстратом - адапторным белком LAT (от Linker for activation of T-cells - линкер активации Т-клеток). Этот белок связан с мембраной и входит в состав рафтов. После катализируемого ZAP-70 фосфорилирования LAT приобретает способность связывать сигнальные молекулы, участвующие в дальнейшей передаче сигнала: адапторные белки SLP-76, Grb2, фактор Vav, а также ферменты - PLCy1 и PI3K. Активация некоторых из упомянутых белков зависит от LAT не напрямую, а косвенно. Так, через SH3-домены

адапторных белков семейства Grb2 к сигнальному пути подсоединяются факторы SLP-76 и Sos. SLP-76, в свою очередь, опосредует подключение к сигнальному пути PLСy1 и ГТФазы Ras. Активация PLCy1 происходит с участием тирозинкиназы Itk, относящейся к семейству Btk - третьему (после Src и Syk) семейству тирозинкиназ, участвующих во внутриклеточной передаче сигнала при активации лимфоцитов. Все сигнальные факторы, вовлекаемые в процесс активации с прямым и косвенным участием LAT, рекрутируются в состав клеточной мембраны и взаимодействуют с ее фосфоинозитидными компонентами. Комплекс, образуемый при взаимодействии SLP-76, Vav и Nck, реагирует с белками цитоскелета PAK и WASP, служащими медиаторами перестроек в цитоскелете активируемых клеток.
Активированная PLCy1 катализирует расщепление фосфатидилино- зитол 4,5-бифосфата с образованием диацилглицерола (DAG), который остается связанным с мембраной, и инозитол-1,4,5-трифосфата (рис. 3.95). Инозитол трифосфат поступает в цитоплазму и взаимодействует с рецепторами на поверхности эндоплазматического ретикулума, что обусловливает выход ионов Са2+ из внутриклеточных хранилищ. Опустошение последних вызывает открытие Са2+-зависимых каналов в клеточной мембране, через которые в клетку поступают ионы Са2+ из внеклеточного пространства. В результате возрастает концентрация свободных ионов Са2+ в цитоплазме клетки. Ионы Са2+ активируют фосфатазу кальциневрин, дефосфорилиру- ющую цитоплазматический компонент транскрипционного фактора NF-AT (Nuclear factor of activated T-cells - ядерный фактор активированных Т клеток) (рис. 3.96). Это обусловливает перемещение фактора в ядро, взаимодействие с ядерным компонентом и формирование зрелой формы молекулы NF-AT, способной взаимодействовать с ДНК в промоторных участках генов, вовлеченных в активацию Т-клеток (IL2, IL2R и др.).
Диацилглицерол традиционно рассматривали как фактор, активирующий протеинкиназу С (PKC) - уже не раз упоминавшуюся ранее серин/тре-

Рис. 3.96. Са2+-зависимое звено активации Т-клеток и его блокада циклоспорином А. Зависимый от инозитолтрифосфата сигнальный путь приводит к мобилизации в ядро транскрипицонного фактора NF-AT. Этот путь может быть блокирован циклоспорином А, способным в комплексе с циклофиллином инактивировать фосфатазу кальциневрин, ответственную за дефосфорилирование цитоплазматического фактора NF-AT (что служит условием его миграции в ядро)

ониновую киназу, признаваемую одним из ключевых факторов активации Т-клеток. Однако оказалось, что изоформы РКС, активируемые диацил- глицеролом, не имеют отношения к активации Т-клеток. В ней участвует изоформа 0 РКС, появляющаяся в иммунном синапсе на пике его «зрелости». Ее рекрутирование в иммунный синапс зависит от активности Р13К и Vav (последний фактор связан с цитоскелетом, роль которого в транспорте РКС0 очень важна). Поскольку активация Vav зависит от сигнализации не только через TCR, но и через CD28, а CD28-зависимый путь реализуется с участием PI3K (она ассоциирована с CD28 - см. далее), становится очевидным, что PI3K и Vav представляют различные этапы одного сигнального пути и, таким образом, вовлечение в активацию молекулы РКС0 зависит от костимуляции через CD28. При этом не вызывает сомнений роль в активации РКС0 сигналов, поступающих от TCR, поскольку РКС0 фосфорили- руется (и, следовательно, активируется) киназой Lck. Допускают участие в активации РКС0 и других факторов, в том числе диацилглицерола, но эти влияния второстепенны. Активация PKC0 необходима для предотвращения апоптоза активируемых клеток и включения двух из трех критических транскрипционных факторов, необходимых для экспрессии генов IL2 и IL2R - АР-1 и NF-kB. РКС0-зависимая активация АР-1 реализуется через Rac/JNK-ветвь MAP-каскада (о нем будет сказано далее). Путь, приводящий к активации транскрипционного фактора NF-kB, содержит в качестве

промежуточных звеньев последовательно активируемые (с участием PKC0) факторы CARMA-1, Bcl-10 и MALT-1, IKK. IKK фосфорилирует ингибирующую субъединицу NF-kB - IkK, придавая ей способность к связыванию убиквитина, что предопределяет ее последующую деградацию. При этом освобождается активная субъединица NF-kB, мигрирующая в ядро и выступающая в роли транскрипционного фактора - одного из трех, необходимых для экспрессии генов активации Т-клеток. Транскрипционный фактор NF-kB, играющий ключевую роль при активации клеток врожденного иммунитета, был рассмотрен выше (см. раздел 2.2.4).
Столь же широко при активации клеток используется еще один сигнальный путь, запускаемый при активации Т-лимфоцитов - MAP-каскад, или MAP-модуль (от Mitogen-activated kinases - киназы, активированные мито- геном). Его роль состоит главным образом в индукции транскрипционного фактора АР-1 (димера c-jun/c-fos). Существует 3 ветви этого каскада, приводящие к образованию трех типов MAP-киназ (MAP^ - ERK1/ERK2 (от Extracellular signal-regulated kinases - киназы, регулируемые внеклеточными сигналами), p38 и JNK (от c-Jun NH2-terminal kinases - c-Jun NH2-концевые киназы). Каскады, приводящие к активации MAP-киназ, включаются с участием адапторных белков и низкомолекулярных ГТФаз. Один из адап- торных белков - Grb2 (Growth factor receptor bound protein 2), активируется при взаимодействии с фактором LAT. Активированный Grb2 спонтанно связывается с другим LAT-активированным белком SLP-76 и фактором Sos (от Son of sevenless). Sos представляет фактор замещения гуаниннуклеотидов: он обусловливает замещение ГДФ на ГТФ в составе малых G-белков (т.е. белков, связывающих гуаниннуклеотиды). Поэтому комплекс SLP-76/Grb2/Sos обусловливает активацию G-белка Ras, превращая связанный с ним ГДФ в ГТФ. Ras-ГТФ активирует серин/треониновую киназу Raf (киназу киназы MAP-киназы - МККК). Далее следует каскад реакций: Raf активирует МЕК (киназу MAP-киназы - МКК), а МЕК активирует вышеупомянутые MAP-киназы ERK1 и ERO. Активацию JNK-ветви MAP-каскада инициирует упоминавшийся выше фактор Vav (зависимый от LAT и связанный с активацией цитоскелета, а также РКС0, см. выше). Он вызывает переход ГДФ в ГТФ в комплексе с G-белком Rac (семейство Rho). Rac-ГТФ активирует киназу МЕКК (выступающую в роли МККК), она активирует киназу JNKK (MKK), которая, в свою очередь, активирует MAP-киназу JNK. Третий путь MAP-модуля, приводящий к образованию MAP-киназы р38, также зависит от G-белков семейства Rho. Он аналогичен по общей схеме двум другим путям, но изучен менее детально.
Активация MAP-киназ ERK1/ERK2, JNK и p38 осуществляется путем фосфорилирования остатков треонина и тирозина в мотиве TXY, причем роль Х в трех типах киназ выполняют различные остатки (соответственно Glu, Pro и Gly). Названные MAP-киназы обусловливают формирование транскрипционных факторов, участвующих во многих клеточных процессах. ERK1/ERK2 обусловливает образование транскрипционных факторов АР-1 и Elk-1, JNK - факторов ATF2, Elk-1 и c-Jun (компонент АР-1), p38 - факторов ATF2, Elk-1 и MEF-2C.
Запуск рассмотренных выше сигнальных путей при активации Т-клеток происходит при параллельном связывании TCR и костимуляции через молекулу CD28. Дифференцирование сигнальных путей, включаемых через эти мембранные молекулы, а также расшифровка взаимодействия этих путей до конца не завершены. Однако общая картина проявляется достаточно четко, чтобы в общих чертах понять молекулярные основы костимуляции. При связывании TCR, координированном со связыванием корецептора, происходит изменение конформации комплекса TCR-CD3, CD4 вызывает активацию рецепторных тирозинкиназ Fyn и Lck, а также фосфатазы CD45. Конечный результат «проксимальных» событий - фосфорилирование Z-цепи рецепторного комплекса и передача активационного сигнала на киназу ZAP-70. Далее с участием адапторных белков LAT, SLP-76 и Vav область, вовлеченная в передачу сигнала, существенно расширяется, включая мембранно-связанные киназы, цитоскелет и малые G-белки. Сигнальный путь, приводящий (через активацию PLCyl, образование инозитолтрифосфата и активацию кальциневрина) к мобилизации Са2+ и активации транскрипционного фактора NF-AT, по-видимому, реализуется без прямого участия сигналов, генерируемых при костимуляции. Другие пути в большей или меньшей степени зависят от костимулирующего сигнала.
Наиболее прямое следствие костимуляции через CD28 - активация мембранного фермента PI3K, физически связанного с молекулой CD28. Этот фермент катализирует образование фосфатидилинозитол 4, 5-бифосфата, служащего источником инозитолтрифосфата. Однако это событие напрямую не связано с активацией и может рассматриваться как подготовительное. При активации клетки фосфатидилинозитолтрифосфат активирует Vav - узловой фактор, ответственный за вовлечение в процесс активации цитоскелета и участвующий в рекрутировании и активации протеинкиназы PKC0. Этот фермент важен для функционирования сигнального пути, приводящего к формированию транскрипционных факторов NF-kB и АР-1. В обоих случаях роль PKC0 в наибольшей степени проявляется во включении Rас/JNK-ветви MAP-каскада. Raf/ERK- и Rac/p38-ветви MAP-каскада в меньшей степени зависят от PKC0, а следовательно, от костимуляции. Таким образом, молекулярная основа костимуляции - вовлечение в процесс активации Т-хелпера сигнальных путей, реализуемых с участием трех ключевых факторов - PI3K, фактора Vav и изоформы 0 протеинкиназы С. Из трех ключевых транскрипционных факторов, запускающих гены активации Т-клеток, экспрессия двух (АР-1 и NF-kB) зависит от костимуляции и только для выработки NF-AT непосредственно костимуляция не требуется.
Таким образом, в результате в Т-клетке формируется 3 транскрипционных фактора - NF-AT, NF-kB AP-1. Формирование этих факторов происходит различными путями. Активный NF-AT образуется в результате сборки димера, включающего цитоплазматический и ядерный субкомпоненты NF-AT - NF-ATc и NF-ATn. Если NF-ATn - конститутивный фактор, всегда присутствующий в ядре Т-клетки, NF-ATc должен быть активирован для миграции в ядро, что достигается его дефосфорилированием, катализируемым кальциневрином (см. выше). Транскрипционный фактор NF-kB активируется путем отщепления от комплекса IkB-NF-kB ингибирующей субъединицы IkB. Как уже говорилось выше, это происходит при фосфорилировании IkB киназой IKK, активируемой с участием РКС0. Фосфорилированная субъединица становится доступной для деградации

по убиквитиновому пути. Фактор АР-1 - димер белковых продуктов двух индуцибельных протоонкогенов - c-fos и c-jun. Для экспрессии этих генов и синтеза белков необходимы соответствующие транскрипционные факторы, а именно Elk-1 (для c-fos) и JNK (для c-jun). Как уже было указано выше, Elk-1 и JNK - конечные продукты деятельности различных ветвей MAP-каскада. Синтезируемые de novo белки c-fos и c-jun образуют гомо- и гетеродимеры, формирующие транскрипционный фактор АР-1.
Рассмотренные три фактора (NF-AT, NF-kB и AP-1) нужны для индукции генов активации Т-клеток - в первую очередь IL2 и IL2R. Промоторный участок гена IL2 содержит 9 сайтов связывания транскрипционных факторов (рис. 3.97). Среди них есть 2 участка связывания октомера Oct, не лимитирующего процесс индукции гена. Из трех ключевых транскрипционных факторов NF-kB взаимодействует с промотором в одном сайте, не зависимом от других транскрипционных факторов. Два других фактора - NF-AT и AP-1 - взаимодействуют с промотором как отдельно друг от друга (по 1 сайту связывания), так и в комплексе (3 сайта связывания). Заполнение всех сайтов соответствующими транскрипционными факторами, приводящее к индукции гена, служит конечным результатом передачи сигнала при активации Т-клеток.
Выше были подробно рассмотрены сигнальные пути, участвующие в активации Т-хелперов. Активация цитотоксических Т-клеток осуществляется по сходным механизмам.
3.5.2.2. Проявления активации Т-клеток
Активация CD4+ Т-клеток (как и любых Т-лимфоцитов) приводит к экспрессии большого числа генов, среди которых наибольшую роль в реализации основных эффекторных событий играют гены IL2 и IL2R, кодирующие соответственно цитокин IL-2 и a-цепь его рецептора. Экспрессия гена IL2 происходит примерно через 1 ч после получения стимулирующего сигнала. Секрецию белка IL-2 стимулированными Т-клетками in vitro выявляют через 3-4 ч; она достигает пика через 8-12 ч и прекращается через 24 ч. In vivo секреция IL-2 начинается через 1-3 сут после введения антигена

Рис. 3.98. Временная динамика экспрессии молекул активации Т-клеток. На графи
ке представлены сроки экспрессии ключевых молекул активации после стимуляции Т-клеток

(иммунизации) и сохраняется в течение 7-12 сут. Экспрессия a-цепи рецептора IL-2 происходит несколько позже и продолжается дольше - in vitro ее выявляют через 4 ч после стимуляции; максимума она достигает через 2-3 сут и прекращается через 5 сут (рис. 3.98).
Одновременно с геном IL2 в кратчайшие сроки после действия стимулятора (в физиологических условиях - антигенного комплекса пептид-MHC) экспрессируются гены с-Myc и N-Myc, называемые ранними активационными генами. Они участвуют в подготовке клеток к митозу. Через 2-3 ч на поверхности Т-клетки появляется CD69 - самый ранний активационный антиген, частично мобилизуемый из внутриклеточных депо, а частично экспрессируемый de novo. Его экспрессия продолжается немногим более суток. Вскоре после CD69 на поверхности клетки появляется другой ранний маркер активации - CD25, представляющий уже упомянутую a-цепь рецептора для IL-2. Несколько раньше выявляют экспрессию ряда цитоки- новых генов и синтез ограниченных количеств соответствующих цитокинов (IFNy, IL-4, IL-5, IL-6).
Следующие проявления активации наблюдают через сутки после действия стимулятора, когда экспрессируется молекула рецептора для транс- феррина (CD71). Этот фактор играет важную роль в пролиферации, поскольку для ее осуществления необходимы ионы железа. В последующие дни (3-6 сут) экспрессируются молекулы MHC-II, относимые к поздним маркерам активации Т-клеток, а затем - р1-интегрины, обозначаемые как очень поздние активационные антигены - VLA (Very late activation antigens), и секретируются хемокины. Эти поздние проявления активации клеток совмещаются с пролиферативным процессом.

Уникальным свойством антигена, проникшего в организм, яв­ляется его способность специфически связываться с лимфоцитами и активировать их.

Согласно клонально-селекционной теории, выдвинутой в 1959 г. Бернетом, при нормальном развитии в организме возникает набор из тысяч очень небольших по объему субпопуляций лимфоцитов, имеющих на наружной мембране рецепторы лишь к одной какой-то детерминанте. Иммунный ответ оказывается специфическим в силу того, что проникший в организм антиген избирательно свя­зывается только с теми клетками, на поверхности которых имеют­ся соответствующие рецепторы. С остальными клетками этот ан­тиген не взаимодействует.

Связывание антигена индуцирует активацию лимфоцита, то есть запускает ряд процессов, приводящих к клеточному деле­нию и дифференцировке. В процессе дифференцировки лим­фоцитов происходит развитие таких эффекторных функций,

как антителообразование у В-клеток и появление цитотокси-ческой активности у части Т-клеток.

Под активацией лимфоцитов понимается достаточно слож­ный процесс перехода клетки из фазы G0 в фазу G1, вызванный взаимодействием со стимулирующим агентом (например, антиге­ном или митогеном). Термин «покоящийся лимфоцит» относится к лимфоцитам, которые находятся в фазе G0 (в этой фазе клеточ­ного цикла клетки не делятся), характеризующейся низким уров­нем метаболической активности, т. е. низкой скоростью синтеза белков и РНК при отсутствии синтеза ДНК. Реагирующие с анти­геном клетки согласно клонально-селекционной теории Бернета обычно находятся в покоящемся состоянии до получения стиму­лирующего сигнала.

При взаимодействии с антигеном в ранее «покоившихся лим­фоцитах» наряду с метаболическими изменениями, характерными для делящихся клеток, происходят процессы созревания, различ­ные в разных субпопуляциях лимфоцитов. В итоге каждая субпо­пуляция приобретает набор присущих только ей поверхностных антигенов и специфических функций.

Последовательность процессов активации лимфоцитов в об­щем виде может быть представлена следующим образом. Рецепто­ры на поверхности лимфоцита связывают стимулирующий лиганд (например, антиген) и сшиваются друг с другом, образуя неболь­шие локальные кластеры сшитых рецепторов, которые становятся наиболее эффективными в передаче активирующего сигнала.

Локальные кластеры повышают проницаемость мембраны лим­фоцита для одновалентных катионов, поступающих внутрь клет­ки, что приводит к деполяризации мембраны и локальному увели­чению концентрации Na + -, K + -АТФазы. Вследствие сшивки ре­цепторов лимфоцита активируется мембранная метилтрансфе-раза, которая катализирует образование достаточного количества монометилфосфатидилэтаноламина, повышающего текучесть мем­браны и вызывающего ее локальную перестройку. В результате этого открываются каналы, через которые ионы Са 2+ проникают (диффундируют) в лимфоцит. Вследствие такого локального уве­личения концентрации Са 2+ с внутренней стороны мембраны ак­тивируется фосфолипаза А2, катализирующая образование лизо-лецитина и арахидоновой кислоты из фосфатидилхолина. Эти ре­акции происходят в течение первых 30 мин после контакта лим­фоцита с антигеном.

Одновременно ионы Са 2+ активируют и другой цитоплазматичес-кий фермент, расщепляющий фосфатидилинозитол (по крайней мере в Т-клетках). Высвобождающаяся арахидоновая кислота при участии липоксигеназы и циклоксигеназы расщепляется с образова­нием лейкотриенов и простагландинов (одни продукты каскада ара­хидоновой кислоты регулируют синтез РНК и ДНК, другие - влия­ют на поглощение ионов Са 2+ или активность аденилатциклазы).

Лизолецитин с помощью ионов Са 2+ активирует гуанилат-циклазу, а активность аденилатциклазы уменьшается вследствие ее соседства с Ш + -К + -АТФазой, конкурирующей с ней за АТФ. Все это приводит к временному увеличению концентрации цГМФ, активирующего протеинкиназы, трансферазы жирных кислот и ферменты, увеличивающие синтез мембранных фосфолипидов. Из других протеинкиназ важное значение имеет активация проте-инкиназ, способствующих биосинтезу матричной РНК, полиами­нов и переносу метальных групп.

Поскольку транспорт глюкозы в клетку является Са-зависи-мым процессом, то поток ионов Са 2+ играет важную роль в уве­личении скорости ее транспорта, т. е. поставки исходного ма­териала для обеспечения множества энергозависимых синте­тических процессов. Повышенный транспорт аминокислот и нуклеотидов в клетку вызывает повышенное образование липо-сом, увеличение синтеза рибосомной и матричной РНК и синте­за белка в целом.

Поток ионов Са 2+ активирует сериновую эстеразу, вызываю­щую повышение клеточной подвижности благодаря изменениям в системе циклических нуклеотидов. Кроме того, сериновая эстера-за опосредованно активирует ядерную аденилатциклазу. Увеличе­ние в ядре концентрации цАМФ вызывает активацию киназ, спе­цифически фосфорилирующих кислые негистоновые белки, регу­лирующие транскрипцию и синтез ДНК. Это приводит к синтезу РНК и ДНК, начинающегося на 3-й сутки и достигающего макси­мума на 4...6-е сутки.

Среди факторов, влияющих на активацию лимфоцитов, следу­ет отметить следующие:

антигены, к которым имеются специфические рецепторы на лимфоцитах; популяцию таких лимфоцитов называют антиген-связывающими клетками;

антитела к иммуноглобулинам; сшивка поверхностных имму­ноглобулинов В-клеток с бивалентными антителами к этим имму­ноглобулинам;

интерлейкины IL-1, IL-2;

инсулин; он опосредованно, через активацию аденилатцикла­зы, активирует лимфоциты.

Ингибирующее влияние на лимфоциты оказывают следую­щие факторы:

липиды; наибольшей ингибирующей способностью из липо-протеидов обладают липопротеиды очень низкой плотности (ЛОНП), обусловливающие разобщение между потоком ионов Са 2+ в клетку и концентрацией образующихся при этом цикличес­ких нуклеотидов;

фрагменты компонентов системы комплемента СЗе, СЗс и C3d; они ингибируют пролиферацию Т-клеток и синтез антител в ответ на стимуляцию с помощью антигена.

Несмотря на то что механизмы активации лимфоцитов раз­личных популяций характеризуются определенной общностью, следует отметить и те особенности, которые наблюдаются при активации Т- и В-лимфоцитов, имеющих различные поверхност­ные маркеры, с помощью которых эти клетки взаимодействуют с внешними факторами.

Активация В-лимфоцитов. В-лимфоциты реагируют на три раз­личных типа антигенов:

2. Тимуснезависимый антиген типа 2 (например, не­которые линейные антигены, имеющие часто повторяющуюся, определенным образом организованную детерминанту, - полиме­ры D-аминокислот, поливонил-пирролидон, полисахарид пнев­мококков).

Эти антигены, длительно персистируя на поверхности спе­циализированных макрофагов краевого лимфатического узла и селезенки, специфически связываются с иммуноглобулиновыми рецепторами В-клеток. Таким образом, оба тимуснезависимых ан­тигена способны непосредственно, т. е. без участия Т-клеток, сти­мулировать В-лимфоциты и вызывать преимущественно синтез IgM. Индуцируемый ими иммунный ответ практически не сопро­вождается формированием клеток памяти.

3. Тимусзависимый антиген. Многие антигены
относятся к группе тимусзависимых. В отсутствие Т-лимфоцитов
эти антигены лишены иммуногенности - связавшись с В-клеточ-
ным рецептором, они, подобно гаптенам, не способны активиро­
вать В-клетку. Одна антигенная детерминанта тимусзависимого
антигена связывается с В-клеткой, а остальные - с Т-хелпером,
активируя его. Т-хелперы должны распознавать детерминанты но­
сителя на поверхности реагирующей В-клетки.

Антиген, связавшийся с поверхностными /gA-клетками, попа­дает в эндосомы вместе с молекулами МНС класса II, а затем возвращается на поверхность А-клетки в процессированной фор­ме. Он ассоциирован с молекулами МНС класса II и доступен для распознавания специфическими Т-хелперами. Носитель процессируется в В-клетках, запрограммированных на синтез антител к гаптену. После стимуляции Т-хелперами, распознаю­щими процессированный носитель, В-клеткам удается выпол­нить свою программу, т. е. начать производить антитела, реаги­рующие с гаптеном.

Механизм активации клеток. Связывание поверхностных рецеп­торов (IgM) В-клеток с антигеном или антителами к этим рецеп­торам вызывает совокупность последовательных реакций, анало­гичных реакциям при активации Т-клеток (поступление в В-лим-фоцит ионов Са 2+ и активация протеинкиназ) - это один меха­низм. Другой, имеющий важное значение для Т-зависимых ан-

Тигенов, - это увеличение экспрессии поверхностных молекул МНС класса II уже на самых ранних этапах активации В-клеток. С моле­кулами МНС класса II и процессированным антигеном связывается Т-хелпер, который продуцирует факторы (например, BSF-1 - от англ. B-cell stimulatory factor), обусловливающие переход В-кле­ток в фазу G-1 клеточного цикла. Как и активированная Т-клетка, стимулированный В-лимфоцит приобретает многочисленные по­верхностные рецепторы для ростовых факторов, выделяемых Т-хел-перами, в этом состоянии он готов к пролиферации - основному процессу в следующей фазе иммунного ответа.

Первыми начинают делиться Т-хелперы, на поверхности ко­торых экспрессируются высокоаффинные рецепторы к IL-2. Эти клетки пролиферируют в ответ либо на собственный IL-2, либо на IL-2, продуцируемый субпопуляцией Т-хелперов. Проли­ферацию В-клеточного клона обеспечивают Т-клеточные раство­римые факторы, в частности BSF-1 (фактор роста В-клеток, име­нуемый чаще интерлейкином-4), выделяемые активированными Т-клетками. Под влиянием других факторов (например, BCDF - от англ. B-cell differentiation factor) происходит созревание клона В-лимфобластов и ускорение их преобразования в плазматичес­кие клетки с высоким уровнем секреции IgM. Другой дифферен-цировочный фактор BCDF (также синтезируется активирован­ными Т-хелперами) переключает синтез с IgM на IgG и индуциру­ет те изменения, которые необходимы для обеспечения высокой скорости синтеза антител.

Активация Т-лимфоцитов. Для активации необходимо два сиг­нала. Роль первого сигнала может выполнять антиген (или мито-ген), связанный с молекулой МНС класса II на поверхности анти-генпрезентирующей клетки. Тройное взаимодействие между ан­тигеном, гликопротеином МНС и рецептором Т-лимфоцита гене­рирует сигнал, передаваемый через комплекс рецептора с моле­кулой CD-3 (это мембраносвязанный белковый комплекс, пред­ставляющий собой антигенспецифический Т-клеточный ре­цептор периферических Т-лимфоцитов), и одновременно обес­печивает воздействие на клетку высокой локальной концентра­ции IL-1 (второй сигнал), продуцируемого антигенпрезентирую-щей клеткой.

Активированные Т-клетки секретируют:

IL-2, стимулирующий деление клеток, имеющих рецептор к IL-2;

лимфокин BSF-1, активирующий В-клетки;

лимфокин BSF -2, стимулирующий клональную экспансию ак­тивированных В-лимфоцитов;

лимфокин BCDF -фактор дифференцировки В-клеток, спо­собствующий созреванию клеток с высокой скоростью секре­ции IgM;

лимфокин BCDF-фактор, вызывающий переключение с син­теза IgM на IgG и высокую скорость секреции последнего.