Лейкоцитарная формула (микроскопия). Исследование крови

При наличии резистентных к лизису эритроцитов они определяются как лейкоциты и вызывают повышение числа WBC. В этих случаях следует обратить внимание на изменение формы RBC гистограммы.

Таблица 11. Возможные ошибки измерения лейкоцитов

6.4. Подсчет лейкоцитарной формулы

Многие современные гематологические анализаторы определяют от 6 до 10 показателей лейкоцитарной формулы с учетом относительного и абсолютного количества клеток, так называемые 3Diff или 5Diff .

6.4.1 Гематологические анализаторы, определяющие 18 параметров крови, дифференцируют все WBC на три популяции (3Diff). В основе работы анализаторов 3Diff лежит принцип кондуктометрии. Клетки дифференцируются по объему на 3 категории: лимфоциты, нейтрофилы и средние клетки, состоящие преимущественно из моноцитов с добавлением эозинофилов и базофилов. Определяется как относительное (%), так и абсолютное их содержание (клетки/л).

Автоматические гематологические анализаторы, определяющие 26 и более параметров крови, дифференцируют WBC на пять популяций (5Diff). В основе работы анализаторов 5Diff используется комбинация кондуктометрического метода с другими технологиями, такими как: метод лазерного светорассеивания, радиочастотный анализ, использование дифференцирующих лизатов, цитохимический метод.

Автоматический дифференцированный счет лейкоцитов должен выполняться в день взятия крови. Для получения наиболее точных результатов дифференциального анализа лейкоцитов рекомендуется исследование образцов крови проводить в промежуток времени от 30 минут до 5 часов после взятия материала, при значительном лейкоцитозе после предварительного разведения крови – от 5 минут до 1 часа.

После 24-часового интервала изменения, возникшие при хранении, могут воздействовать на систему «сигналы тревоги» и искажать результат. На дифференциальный счет популяций лейкоцитов влияют те же факторы, что и на общее число лейкоцитов. Появление «сигналов тревоги» указывает на наличие патологических изменений в исследуемом образце и требует микроскопического исследования окрашенного мазка крови.

6.4.2 Некоторые факторы, влияющие на дифференциальный счет лейкоцитов в гематологических анализаторах 3Diff

LY и LY%: микроформы бластов, нормобласты, резистентные к лизису эритроциты (например, эритроциты, содержащие малярийный плазмодий) могут быть причиной ошибочного измерения числа LY.

MO и MO%: крупные лимфоциты, атипичные лимфоциты, плазматические клетки, бластные клетки и избыточное количество базофилов могут оказывать влияние на точность подсчета МО. Часть эозинофилов также может просчитываться в данном канале.

GR и GR%: избыток эозинофилов, метамиелоцитов, промиелоцитов, бластных клеток и плазматических клеток могут быть причиной ошибочного подсчета GR и GR%.

На лейкоцитарной гистограмме в анализаторах 3Diff субпопуляции лейкоцитов попадают в три главные области гистограммы распределения WBC, которые отделены с помощью пороговых значений (дискриминаторов). Если результаты подсчета попадают в область нормальных значений, то никаких маркеров, предупреждающих о возможной патологии не появляется. Форма гистограммы изменяется при нарушении распределения лейкоцитов по популяциям или недостаточном лизисе эритроцитов.

Таким образом, гематологические анализаторы 3Diff в большинстве случаев позволяют выявлять изменения лейкоцитарной формулы крови, однако не способны проводить полную дифференцировку лейкоцитов. При наличии микроформ бластных клеток, по своему размеру сходных с лимфоцитами, анализаторы, принцип измерения которых основан только на кондуктометрическом методе, будут относить их к популяции мелких клеток (лимфоцитов).

6.4.3 В гематологических анализаторах 5Diff подсчитываются все 5 классов лейкоцитов, встречающихся в норме: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы. Использование одновременно нескольких методов анализа позволяет значительно улучшить качество дифференцировки клеток и, следовательно, работу анализатора. В анализаторах данного типа более сложная система «сигналов тревоги», позволяющая уточнить наличие патологических клеток (незрелых нейтрофилов, атипичных лимфоцитов, бластных клеток, нормобластов). При плохом качестве материала анализаторы выдают дополнительные «сигналы тревоги», такие, например, как сгустки тромбоцитов, фрагменты эритроцитов-призраков. Они снабжены соответствующими программами обнаружения незрелых клеток, активированных лимфоцитов, бластных клеток.

Обозначения флагов дифференциальных параметров зависят от фирмы-производителя анализатора.

Это могут быть: LIC (Large Immature Cells), которые, в свою очередь, подразделяются на:

IMG (Immature Granulocytes), незрелые гранулоциты,

IMM (Immature Monocytes) незрелые моноциты,

IML (Immature Lymphocytes) незрелые лимфоциты,

LS (Left Shift) – левый сдвиг, указывающий на возможность левого сдвига в формуле крови (палочкоядерные нейтрофилы)

исследование мазка крови.

При лимфоцитозах или наличии измененных по объему лимфоцитов появляются следующие флаги:

Аtipical Lymphocytes, Variant

Lymphocytes, Reactive

Lymphocytes, Abnormal Lymphocytes

Большинство гематологических анализаторов 5Diff имеют жесткую систему как внутреннего, так и внешнего контроля качества, что делает их работу более надежной.

Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию.

1. 
   Контроль качества исследования клеточного состава крови на автоматических гематологических анализаторах
   1. 
      Порядок проведения контроля качества

Установления единых требований к аналитическому качеству количественных методов;

Ежесерийного выполнения процедур внутрилабораторного контроля качества с использованием контрольных материалов (оперативный контроль качества);

Регулярного участия в программах внешней оценки качества (ГОСТ Р 53133.1―2008) .

Внутрилабораторный контроль качества представляет собой систему повседневного слежения за точностью получаемых на гематологическом анализаторе результатов для поддержания стабильности аналитической системы, выявления и устранения недопустимых случайных и систематических погрешностей и заключается в сопоставлении результатов исследования проб с результатами исследования контрольного материала и измерении величины отклонения.

Проводится в соответствии с инструкцией к прибору и инструкцией к используемым контрольным материалам и требованиями стандарта ГОСТ Р 53133.2―2008 ..

Внутрилабораторный контроль качества должен быть:

Систематическим, повседневным, проводиться по единым правилам, т.е. анализ контрольных проб должен включаться в обычный ход работы лаборатории;

Охватывать все области измерений (норма, высокие и низкие патологические значения);

Производиться в реальных условиях работы лаборатории (так же, как обычные пробы пациентов, т.е. тем же персоналом и в тех же условиях);

Объективным (желательно "шифровать" контрольный материал, чтобы исполнитель не знал, где опыт, а где контроль).

Принцип проведения внутреннего контроля достаточно прост: периодически (в каждой серии) нужно проводить измерение одного и того же контрольного материала, а результаты этих измерений заносить на контрольную карту.

Хорошо организованная система внутреннего контроля качества позволяет достаточно эффективно выявлять ошибки, связанные с:

• 
  внешними варьирующими факторами (реактивы, калибраторы, расходные материалы);

• 
  внутренними варьирующими факторами (организация в лаборатории "домашних реактивов", обучение персонала, обслуживание приборов, ведение документации, реакция персонала на возникающие проблемы).

Контролем за правильностью измерения концентрации гемоглобина может служить величина МСНС.Чаще всего увеличение МСНС свидетельствует об ошибках, допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV). В подобных ситуациях наиболее точные результаты определения концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом могут быть получены на фотометре при добавлении в холостую пробу 20 мкл сыворотки больного. Таким образом, данный параметр может быть использован и как индикатор ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапах работы.

1. 
   Требования к качеству исследований клеточного состава крови

Для оценки качества исследований рассчитываются следующие статистические

показатели:

Среднее арифметическое значение или средняя арифметическая (Х):
- предварительная оценка прецизионности (по 10 измерениям в одной серии) - CV 10 ;

Предварительная оценка относительного смещения – В 10 ;

Окончательная оценка прецизионности (по 20 измерениям) CV 20 ;

Окончательная оценка относительного смещения В 20 .

В таблице 11 представлены рекомендуемые стандартом ГОСТ Р 53133.1─2008 (приложение А) внутрилабораторных погрешностей гематологических исследований. Эти ПДЗ вычислены как компромисс между основанными на коэффициентах биологической вариации пределами погрешностей и фактическими характеристиками точности, достигнутыми большей частью клинико-диагностических лабораторий страны по данным системы внешней оценки качества.

Таблица 12

Оперативные пределы допускаемых значений

В таблице 13 представлены ПДЗ, рассчитанные на основе имеющихся в литературе данных о биологической вариации. Их можно рассматривать как желательные нормативы.

Таблица 13

Оперативные пределы допускаемых значений, рассчитанные на основе данных о биологической вариации

Клинический анализ крови означает подсчет количества клеток в образце венозной крови. Капиллярная кровь не является рекомендуемой средой исследования для подсчета клеток, однако исследование гемограммы часто выполняют из образца капиллярной крови в отделениях интенсивной терапии.

Определение лейкоцитарной формулы, исследование среднего размера эритроцитов, тромбоцитов, определение количества предшественников эритроцитов (ретикулоцитов) и степени их зрелости, оценка скорости оседания эритроцитов и т.д., все это входит в понятие «клинический анализ крови».

Клинический анализ крови выполняется как первое скрининговое исследование при обращении и жалобах пациента на недомогание. Может быть выполнен сокращенный клинический анализ крови, так называемая «тройка» – подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Сокращенный клинический анализ крови малоинформативен, т.к. может охарактеризовать только выраженные патологические процессы.

Более целесообразно из того же объема образца крови выполнить развернутую гемограмму: подсчет количества эритроцитов с оценкой их среднего размера (MCV), подсчет общего количества лейкоцитов и оценку лейкоцитарной формулы (подсчет нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов), подсчет количества тромбоцитов и оценку среднего размера тромбоцита (MPV), ретикулоцитов и их среднего размера (MRV), степени зрелости ретикулоцитов (IRF).

Многочисленные характеристики клеток в настоящее время могут быть получены в автоматическом режиме в течение 3-5 минут после взятия крови. На основании развернутого исследования гемограммы может быть сделано не только заключение о наличии воспалительной реакции, анемии, но и характере других патологических процессов, возможной перенесенной или продолжающейся кровопотере, дефиците не только железа, но и витамина В12, фолиевой кислоты.

Показания к исследованию

• Скрининговое обследование при профилактическом осмотре, диспансеризации;
• первичное обследование при госпитализации;
• диагностика анемий;
• диагностика болезней системы кроветворения;
• инфекционные заболевания;
• воспалительные процессы;
• гемато-онкологические заболевания;
• контроль эффективности терапии.

Метод исследования

Метод исследования зависит от требуемых параметров гемограммы.

В ручном режиме, из образца крови (3–5 мл) часть отбирается в капилляр для определения СОЭ, часть образца крови используется для определения гемоглобина, капля крови – для приготовления мазка и дальнейшего подсчета лейкоцитарной формулы. Отдельное количество крови требуется для приготовления мазка и подсчета тромбоцитов, а также часть образца крови необходима для исследования количества эритроцитов и отдельно – ретикулоцитов. В ручном режиме, при необходимости окраски и визуальной оценки мазка, результат развернутой гемограммы пациента в многокоечном стационаре, может быть получен в конце рабочего дня или позднее.

В условиях автоматизированного подсчета клеток и оценки различных популяций требуется от 150 до 300 мкл крови и 100 мкл для определения СОЭ. Исследование в автоматическом режиме основано на импедансном методе Культера (1956), в основе которого лежит принцип замыкания электрической цепи каждой клеткой, последовательно проходящей через апертуру пробоотборника. В последующем метод автоматизированного подсчета получил ряд усовершенствований, в современных анализаторах каждая клетка оценивается по нескольким параметрам: проводимости, светорассеиванию, размеру, наличию на поверхности CD-маркеров, соответственно, принадлежности к различным популяциям. Количество параметров определяется моделью прибора.

Исследование в автоматическом режиме позволяет выявить патологические образцы, которые должны быть пересмотрены визуально специалистом лабораторной диагностики. Визуальный контроль гемограммы предполагает приготовления мазка крови, слайда, что может быть выполнено из капли крови уже взятого образца как в ручном, так и автоматическом режиме. Автоматизированное приготовление мазка крови предпочтительно, т.к. происходит равномерное распределение капли крови и стандартизированное окрашивание. Визуальная микроскопия мазка проводится в пяти полях зрения.

Исследование крови в автоматическом режиме занимает 3–5 минут, если не требуется дополнительное приготовление мазка и исследование СОЭ.

Условия взятия и хранения образца

Клинический анализ крови выполняется из венозной крови, стабилизированной калиевой солью ЭДТА, если не указано иначе в инструкции к анализатору. Взятие крови выполняется натощак. Образец крови должен быть немедленно после взятия перемешан 9 раз осторожным переворачиванием, следует избегать образования пены и резкого встряхивания. До исследования образец крови может храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 часов в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

При использовании образца капиллярной крови для клинического анализа необходимо получить свободнотекущие капли капиллярной крови из предварительно прогретой области прокола. Сбор капиллярной крови без сдавливания пальца обеспечивает сохранность клеток. Надавливание области прокола и сбор образца из охлажденной конечности приведут к искажению результатов гемограммы. Образцы капиллярной крови должны быть стабилизированы калиевой солью ЭДТА, поэтому для взятия образца следует использовать капилляры, обработанные K3ЭДТА. Образцы могут храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 ч в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

В настоящее время наиболее широко применяется исследование общего анализа крови, позволяющее оценить качественный и количественный состав крови. Гематологическая норма является статистическим показателем и отражает среднюю величину, наблюдаемую в популяции здоровых лиц.

Забор крови для проведения анализа производят из пальца или из вены. Анализ сдается утром, натощак. В течение 8 часов до сдачи анализа не допускается прием пищи, в том числе, соки, чай, кофе, алкоголь. Можно пить простую воду.

Подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов можно производить с использованием микроскопа и камеры Горяева-Розенталя и современных геманализаторов. В то же время, исследование мазка крови способно помочь в диагностике патологических процессов, при которых количественное содержание клеток может оставаться нормальным.

Эритроциты

Эритроциты составляют основную массу форменных элементов крови. У человека они лишены ядра и имеют двояковогнутую форму.

Снижение количества эритроцитов наиболее часто встречается в клинической практике и является одним из признаков анемического синдрома. Но следует помнить, что относительное уменьшение количества эритроцитов может наблюдаться при увеличении объема плазмы (гидремии), за счет усиленного притока тканевой жидкости в период схождения сердечных и почечных отеков, при введении большого количества жидкости внутривенно.

Повышение количества эритроцитов наблюдается при эритремии (болезнь Вакеза), а также при вторичных абсолютных и относительных эритроцитозах.

Абсолютные эритроцитозы встречаются при:

• хронических обструктивных заболеваниях легких,
• врожденных или приобретенных пороках сердца,
• первичной легочной гипертензии,
• синдроме Пиквика,
• пребывании в высокогорных районах,
• стенозе почечных артерий,
• поликистозе почек,
• гидронефрозе,
• злокачественных новообразованиях (например, надпочечников),
• болезни и синдроме Кушинга,
• лечении стероидами.

Относительные эритроцитозы встречаются при неукротимой рвоте, диарее, массивных ожогах и шоке.

При исследовании патологических изменений морфологии эритроцитов можно выявить:

• клетки различной формы (пойкилоцитоз),
• клетки различной окраски (анизохромия),
• клетки различного размера (анизоцитоз),
• различные внутриклеточные включения.

Размеры нормальных эритроцитов (нормоцитов) составляют 7,2 — 8,0 мкм в диаметре. Анизоцитоз — патологическое состояние, при котором происходит изменение размеров эритроцитов:

• микроцитоз (менее 7,0 мкм в диаметре) наблюдается при железодефицитных анемиях, гемоглобинопатиях;
• макроцитоз (более 8,0 мкм в диаметре) — при анемии беременных, дефиците витамина В 12 и фолиевой кислоты, а также при заболеваниях печени, алкоголизме и злокачественных новообразованиях;
• мегалоцитоз (более 11 мкм в диаметре) — при дефиците витамина В 12 и фолиевой кислоты, анемиях беременных, глистных инвазиях.

В крови здорового человека содержание нормоцитов не превышает 70 % от всего объёма, тогда как на долю микроцитов и макроцитов приходится до 15 %. Изменение этого соотношения, которое может быть определено анализом крови, указывает на развитие анизоцитоза. Клинические симптомы анизоцитоза сходны с анемией или сердечной недостаточностью и характеризуются быстрой утомляемостью, упадком сил, учащённым сердцебиением и одышкой. Лечение анизоцитоза, как правило, сводится к устранению причины его появления.

Анизоцитоз и пойкилоцитоз встречаются практически при всех видах анемий. При этом форма эритроцитов может быть:

• шаровидной (болезнь Минковского — Шоффара),
• серповидной (наследственная серповидноклеточная гемолитическая анемия),
• овальной (при наследственном овалоцитозе),
• мишеневидной (при талассемии и свинцовом отравлении).

Окраска эритроцитов также может меняться:

• гипохромия (уменьшение интенсивности окраски эритроцитов) характерна для многочисленных железодефицитных анемий, талассемии, свинцового отравления;
• гиперхромия (повышение насыщения эритроцитов гемоглобином) встречается при дефиците витамина В 12 и фолиевой кислоты, алкоголизме, беременности.

Полихроматофилы (эритроциты с недостаточным накоплением гемоглобина и остатками базофильной субстанции) наблюдаются как в норме, так и при увеличении регенераторной активности костного мозга во время острой кровопотери, массивном гемолизе.

Расчетные показатели

При проведении исследований с помощью автоматических анализаторов часто используются расчетные величины.

Цветовой показатель

Цветовой показатель (ЦП ) отражает среднее содержание гемоглобина в эритроците и определяется по формуле:

ЦП = Hb × 3 11 / Er, где Hb — гемоглобин (г/л), Er — число эритроцитов в 1 литре крови.

Нормы цветового показателя равны 0,82 — 1,05. По величине цветового показателя анемии делят на:

• гипохромные (0,82 и ниже),
• нормохромные (0,82 — 1,05),
• гиперхромные (1,1 и выше).

Величина гематокрита

Определение гематокрита (Ht ) проводят микроцентрифугированием или автоматическим способом. Величина гематокрита дает представление о соотношении между объемами плазмы и форменных элементов (главным образом эритроцитов), полученными после центрифугирования крови. Выражается в процентах и рассчитывается по формуле:

Ht = 11,72 + 5,045 × Er / 10 11 , где Er — число эритроцитов в 1 литре крови.

Норма гематокрита у мужчин 40,7-50,3%, у женщин — 36,1-44,3%. Этот показатель меняется как в сторону повышения, так и понижения.

• Повышение наблюдается при обезвоживании организма, уменьшении ОЦП (массивные ожоги, шок), первичных и вторичных эритроцитозах.
• Снижение может быть при гипергидратации организма, увеличении ОЦП.

Средний эритроцитарный объем

Средний эритроцитарный объем (СЭО ) определяют с помощью геманализатора и вычисляют по формуле:

СЭО = Ht / Er × 10 -9 , где Ht — гематокрит, Er — число эритроцитов в 1 мкл крови.

Единицей СЭО являются фемтолитры (фл). Этот показатель в среднем одинаков для мужчин и женщин — 80-94 фл.

• Уменьшение СЭО встречается при микроцитарных анемиях.
• Увеличение — при макроцитарных и мегалобластических анемиях.

ССГЭ = Hb / Er, где Hb — содержание гемоглобина (г/л), Er — число эритроцитов в 1 литре.

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКГЭ ) отражает степень насыщения эритроцита гемоглобином, выражается в г/дцл. Вычисляется по формуле:

СКГЭ = Hb / Ht, где Hb — содержание гемоглобина (г/л), Ht — гематокрит (%).

Нормальное значение этого показателя составляет 34,4 г/дцл (30 — 38,5). СКГЭ может только понижаться как при гипохромных анемиях, так и гиперхромных.

Ретикулоциты

Ретикулоциты — молодые формы эритроцитов, образовавшиеся из нормобластов после потери ими ядра. В норме их количество равно 0,5-1,5% в периферической крови. Ретикулоцитоз отражает эритропоэтическую активность костного мозга.

• Увеличение числа ретикулоцитов наблюдается при усиленной регенерации костного мозга, например, при острой кровопотере, гемолитической анемии.
• Уменьшение — при гипо- и апластических анемиях, В 12 -дефицитной анемии, метастазах в костный мозг, указывая на снижение регенераторной функции костного мозга.

Еще более точным показателем эритропоэза является ретикулоцитарный индекс (РИ ), который вычисляется с учетом гематокрита по формуле:

РИ = R × Ht / 45 × 1,85, где R - число ретикулоцитов (%), Ht - гематокрит пациента (%), 45 - гематокрит человека в норме, 1,85 - количество суток, которые необходимы для поступления новых ретикулоцитов в периферическую кровь.

Показатель РИ:

• меньше 2 - свидетельствует о сниженной продукции эритроцитов,
• более 2-3 - свидетельство увеличения образования эритроцитов.

Скорость оседания эритроцитов

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ ) зависит от содержания белков в плазме крови, главным образом фибриногена и γ-глобулинов, состоящих в основном из иммуноглобулинов, и количества форменных элементов.

Основными причинами повышения СОЭ являются воспалительные бактериальные и асептические процессы, сопровождающиеся изменениями белкового спектра плазмы крови (системные заболевания соединительной ткани, хронические гепатиты и циррозы печени, инфаркт миокарда и др.).

При злокачественных новообразованиях увеличение СОЭ обусловлено той же причиной. Значительное повышение СОЭ выявляют при увеличении в плазме концентрации парапротеинов при миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема. При всех видах анемий происходит увеличение СОЭ.

Уменьшение СОЭ является признаком повышения вязкости крови при заболеваниях и синдромах, сопровождающихся увеличением числа эритроцитов.

Тромбоциты

Тромбоциты играют важную роль в поддержании баланса между свертывающей и противосвертывающей системами крови, являясь важным звеном тромбоцитарно-сосудистого механизма гемостаза. Нормальное количество тромбоцитов составляет 180—320×10 9 /л.

В клинической практике могут наблюдаться состояния, характеризующиеся как увеличением количества тромбоцитов (тромбоцитоз), так и уменьшением (тромбоцитопения), а также нарушением адгезивных, агрегационных и коагуляционных функций тромбоцитов (тромбоцитопатии).

Тромбоцитозы делятся на:

• первичные (идиопатический, эссенциальный и хронический мегакариоцитарный лейкоз),
• вторичные (причинами которых являются железодефицитные анемии, спленэктомия, злокачественные новообразования, коллагенозы, хронические воспалительные заболевания кишечника, сублейкемический миелоз, эритремия и др.)

Тромбоцитопении также бывают:

• первичными (острая или хроническая идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура),
• вторичными, которые развиваются при воздействии:
  • физических факторов - ионизирующего излучения и механического повреждения тромбоцитов;
  • биологических факторов - иммунных антител, цитолитических факторов опухолевых клеток, переливания "старой" консервированной крови, вирусных заболеваний;
  • химических факторов - промышленных и бытовых химических веществ, лекарственных препаратов.

Лейкоциты

Лейкоциты — клетки крови, образующиеся в костном мозге и лимфатических узлах, характеризуются высокой и сложной структурной организацией и специализацией. В норме количество лейкоцитов составляет 4,0—8,8×10 9 /л.

Различают 5 видов лейкоцитов: гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) и агранулоциты (моноциты и лимфоциты). Основной функцией лейкоцитов является защита организма от чужих для него антигенов (в том числе, микроорганизмов, опухолевых клеток, клеток трансплантата).

Лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов) может встречаться у здоровых людей после приема пищи, богатой белками; тяжелой физической работы и во время стресса; после перегревания или охлаждения. В патологии основными причинами лейкоцитоза являются:

• острые инфекции,
• любые острые или хронические воспалительные заболевания,
• заболевания, сопровождающиеся распадом тканей (инфаркт миокарда, инсульт, панкреонекроз и др.) и/или выраженной интоксикацией (уремия, кетоацидоз),
• патологические состояния, для которых характерна выраженная гипоксемия (острая кровопотеря),
• действие токсических веществ (угарного газа, ртути) и физических факторов (ионизирующего излучения),
• злокачественные новообразования,
• острые и хронические лейкозы, сопровождающиеся пролиферацией одного из ростков кроветворения,
• полицитемия,
• заболевания, характеризующиеся иммунными нарушениями (коллагенозы, сывороточная болезнь и другие).

Лейкемоидная реакция — это стойкий лейкоцитоз до 30-50×10 9 /л и более, развивается при инфекции, злокачественных новообразованиях, экзогенной и эндогенной интоксикациях и других состояниях. В отличие от лейкозов при лейкемоидной реакции в крови циркулируют нормальные, преимущественно зрелые нейтрофилы.

У пожилых людей, истощенных и ослабленных больных при развитии ряда заболеваний, для которых характерен лейкоцитоз, он может отсутствовать из-за снижения иммунной сопротивляемости организма.

Лейкопения (уменьшение количества лейкоцитов) встречается при следующих патологических состояниях:

• вирусных инфекциях,
• некоторых бактериальных и протозойных инфекциях,
• гипоплазии и аплазии костного мозга,
• побочном действии цитостатических препаратов, антибиотиков, сульфаниламидов, НПВС,
• спленомегалии.

Лейкоцитарная формула

Лейкоцитарная формула (лейкограмма) — это процентное соотношение различных видов лейкоцитов в периферической крови. При различных заболеваниях может происходить изменение лейкоцитарной формулы за счет:

• увеличения или уменьшения какого-либо вида лейкоцитов;
• появление различных дегенеративных изменений в ядре и цитоплазме зрелых клеток лейкоцитов;
• появление в периферической крови молодых незрелых лейкоцитов.

В клинической практике лейкограмма имеет большое значение. По данным лейкограммы можно судить о ходе патологического процесса, появлении осложнений и прогнозировать исход болезни. Данные лейкограммы следует сопоставлять с клиническими проявлениями болезни.

Нейтрофилы

Нейтрофилы — подвид гранулоцитарных лейкоцитов, обладающие, в основном, бактерицидной и дезинтоксикационной функциями. Ведущий механизм их иммунной функции — фагоцитоз. Они являются микрофагами, то есть способны поглощать лишь относительно небольшие чужеродные частицы или клетки.

В зависимости от степени зрелости и формы ядра в периферической крови выделяют палочкоядерные (более молодые, незрелые) и сегментоядерные (зрелые) нейтрофилы. Более молодые клетки нейтрофильного ряда - метамиелоциты, миелоциты, промиелоциты - появляются в периферической крови в случае патологии и являются свидетельством стимуляции образования клеток этого вида. Длительность циркуляции нейтрофилов в крови составляет в среднем примерно 6,5 часов, затем они мигрируют в ткани.

Сегментоядерные нейтрофилы в норме являются основным видом лейкоцитов, циркулирующих в крови человека, составляя 45-70% общего количества лейкоцитов крови. Палочкоядерные нейтрофилы в норме составляют 1—6 %.

Нейтрофилез — увеличение количества нейтрофилов больше 6,0×10 9 /л — является отражением своеобразной защиты организма на воздействие экзогенных и эндогенных факторов, обычно сочетается с лейкоцитозом и имеет те же причины.

При оценке диагностической и прогностической значимости нейтрофильного сдвига важно определить процентное соотношение незрелых и зрелых нейтрофилов.

• Сдвиг формулы влево — это повышение в периферической крови палочкоядерных нейтрофилов (при гнойно-воспалительных процессах, острых инфекциях) и (реже) появление в небольшом количестве незрелых гранулоцитов.
• Сдвиг формулы вправо — это увеличение в периферической крови зрелых сегментоядерных нейтрофилов и снижение или исчезновение палочкоядерных, как правило, свидетельствует о благоприятном течении заболевания.

Нейтропения — снижение содержания нейтрофилов ниже 1,5×10 9 /л — свидетельствует о функциональном или органическом угнетении костномозгового кроветворения или об интенсивном разрушении нейтрофилов. Обычно сочетается с лейкопенией.

Эозинофилы

Эозинофилы — подвид гранулоцитарных лейкоцитов. Они обладают фагоцитарными свойствами, но это свойство используют прежде всего для участия в аллергическом процессе. Они фагоцитируют комплекс антиген-антитело, образованные преимущественно Ig E. В норме содержание эозинофилов в крови: 0-5%.

Эозинопения — уменьшение количества эозинофилов, встречается при инфекционных, гнойно-воспалительных процессах и приеме глюкокортикоидов. Наиболее выраженная эозинопения выявляется при эндокардите Леффлера, эозинофильном лейкозе и гиперэозинофильном синдроме, приеме глюкокортикоидов.

Базофилы

Базофилы — очень крупные гранулоциты: они крупнее нейтрофилов и эозинофилов. Гранулы базофилов содержат большое количество гистамина, серотонина, лейкотриенов, простагландинов и других медиаторов аллергии и воспаления. Базофилы участвуют в воспалительных и аллергических процессах в организме. В норме содержание базофилов в крови: 0-1%.

Базофилия (увеличение числа базофилов) встречается редко, например, при миелопролиферативных процессах (хроническом миелолейкозе, полицитемии, миелофиброзе), гипотиреозе, лимфогрануломатозе. Базопения (уменьшение количества базофилов) диагностического значения не имеет.

Лимфоциты

Лимфоциты — главные клетки иммунной системы, представляющие собой разновидность лейкоцитов группы агранулоцитов. Лимфоциты обеспечивают гуморальный иммунитет (выработка антител), клеточный иммунитет (контактное взаимодействие с клетками-мишенями), а также регулируют деятельность клеток других типов. В норме содержание лимфоцитов в крови: 18-40%.

Лимфоцитоз — увеличение числа лимфоцитов в периферической крови. Это увеличение может быть абсолютное (больше 3,5×10 9 /л) при острых инфекциях, туберкулезе, гипертиреозе, лимфолейкозе и лимфосаркоме. Но чаще встречается относительный лимфоцитоз (увеличение процента лимфоцитов при нормальном или пониженном абсолютном их количестве). Такое состояние встречается при вирусных инфекциях, гнойно-воспалительных процессах, протекающих при пониженной сопротивляемости организма, брюшном тифе, агранулоцитозе.

Лимфоцитопения — уменьшение числа лимфоцитов в периферической крови. Абсолютная лимфоцитопения (количество клеток менее 1,2×10 9 /л) может указывать на недостаточность Т-системы иммунитета (иммунодефицит), а также характерна для милиарного туберкулеза, лимфомы, острой и хронической лучевой болезни, миеломной болезни. Относительная лимфоцитопения самостоятельного значения не имеет.

Моноциты

Моноциты — крупные зрелые одноядерные лейкоциты группы агранулоцитов. Ведущий механизм их иммунной функции — фагоцитоз. Они являются макрофагами, то есть могут поглощать относительно крупные чужеродные частицы и клетки (или большое количество мелких частиц), и, как правило, не погибают после фагоцитирования (но возможна гибель моноцитов при наличии у фагоцитированного материала каких-либо цитотоксических для моноцита свойств). Этим они отличаются от микрофагов — нейтрофилов и эозинофилов, способных поглощать лишь относительно небольшие чужеродные частицы, и, как правило, погибающих после фагоцитирования.

Длительность циркуляции моноцитов в крови составляет в среднем примерно 2-3 дня, затем большинство из них - либо гибнет через апоптоз, либо становятся макрофагами (например, в кишечнике). В норме содержание моноцитов в крови: 2-9%.

Моноцитоз — увеличение числа моноцитов в периферической крови. Встречается в виде абсолютного моноцитоза при некоторых инфекциях (инфекционном мононуклеозе, подостром септическом эндокардите, вирусных, грибковых, риккетсиозных и протозойных инфекциях), длительно протекающих гнойно-воспалительных заболеваниях, злокачественных солитарных опухолях, заболеваниях крови: остром моноцитарном лейкозе, хроническом миелолейкозе, миеломной болезни, лимфогрануломатозе, апластической анемии.

Моноцитопения (снижение или отсутствие моноцитов в периферической крови) развивается при тяжелых инфекционных процессах (сепсис).

Пациенты с заболеваниями крови приходят к врачу при появлении тех или иных симптомов, прямо указывающих на патологию крови, или обращаются по поводу недомоганий, на самом деле обусловленных гематологическими проблемами. Например, пациент жалуется врачу на одышку, а при лабораторном исследовании обнаруживается низкий . Это может быть проявлением кардиоваскулярной патологии, но такая анемия нуждается в обязательном выявлении ее этиологии (возможны желудочно-кишечное кровотечение из пептической язвы или карцинома толстой кишки). Таким образом, анемия (как и большинство других гематологических проблем) должна служить лишь исходным пунктом для поиска патофизиологического механизма, лежащего в основе гематологических признаков или симптомов. Так же, как обычная кожная сыпь может оказаться либо проявлением местных нарушений, либо следствием глубокого расстройства гомеостаза, гематологические синдромы или заболевания могут иметь как вполне безобидные, так и весьма опасные для жизни причины, которые должны быть вскрыты и изучены клиницистом.
В таблицах этого раздела представлены основные элементы оценки анамнеза и результаты физикального обследования применительно к заболеваниям крови. В первых двух колонках перечисляются данные анамнеза и физикального обследования; в третьей колонке - возможные варианты патофизиологических объяснений. Там же представлены связи между различными заболеваниями и ключевые этиологические моменты.
Когда изучение анамнеза и физикальное обследование завершены, проведены исследования периферической крови, костного мозга, оценены другие важные лабораторные данные, появляется возможность создания рабочей диагностической гипотезы, объединяющей множество сложных переменных. Необходимо свободное, творческое и в то же время вполне конкретное приближение к формулировке диагноза.
Изучение анамнеза, физикальное обследование и наконец лабораторная диагностика предоставляют врачу все больше и больше информации. Иногда приходится вернуться к койке больного или в лабораторию для того, чтобы перепроверить начальные данные. Могут появиться дополнительные, более обстоятельные или косвенно подтверждающие определенную точку зрения вопросы. Для координирования все нарастающего объема данных может потребоваться проведение пропущенных при первичном осмотре компонентов физикального обследования, равно как и других манипуляций, обусловленных появлением новой информации. Таким образом, для полного согласования всех данных необходимо, как правило, неоднократно обследовать пациента. В этом есть свои преимущества, с другой стороны, бесконечный пересмотр и перепроверка «установившихся фактов» могут подрывать репутацию врача. Более того, при первичных расспросах врача пациент невольно «настраивается» на определенные ответы, и повторный сбор анамнеза часто не дает никаких результатов.
Когда диагноз практически поставлен, понятно стремление врачей не включать или активно исключать оставшиеся диагностические возможности, если те или иные данные, полученные впоследствии, не согласуются с рабочей гипотезой или если терапия, основанная на рабочей гипотезе, не приводит к желаемым результатам. Такой достаточно распространенный феномен «раннего закрытия» опасен как возможная причина врачебных ошибок. Будучи уверенным в недостаточно обоснованной гипотезе, врач может исключить из рассмотрения следующие возможности:

1. Одновременное развитие нескольких патофизиологических процессов (например, гемолитической анемии, сопровождающейся падением гематокрита с необходимостью постоянных гемотрансфузий, может сопутствовать потеря крови из желудочно-кишечного тракта).
2. Редко встречающееся проявление обычного заболевания (например, при нарушении познавательной функции у пациента без признаков анемии необходимо рассмотреть возможность недостаточности витамина B12).
3. Распространенное проявление редко встречающегося заболевания (например, причиной , обнаруживающейся петехиями и суставными болями, обычно бывает такой коллагеноз, как системная красная волчанка, но вместе с тем может быть и ).

Это врачи, которые видят пациента через окуляр микроскопа. Это определение можно было бы признать эксцентричным, если бы оно не было так близко к истине. Согласно ему, любой клиницист мог бы легко стать членом «гематологического клуба», но в действительности это не так. Конечно, мазок периферической крови не может полностью заслонить собой пациента. Но тот, кто тщательно исследовал этот мазок, может свести воедино фрагментарные данные, сфокусировать неясно сформулированные идеи, поднять на уровень научного знания интуитивные догадки. Поскольку для постановки диагноза требуется соблюдение правил получения и анализа клинической и лабораторной информации, при оценке мазка периферической крови необходимо тщательно сопоставить морфологические особенности крови пациента с данными анамнеза и физикального обследования. Иными словами, возвращение к постели больного или в лабораторию позволяет получить, прояснить и согласовать новую информацию. Этот процесс стимулируют результаты микроскопического исследования мазка крови (размеры, форма, патологические включения эритроцитов, лейкоцитов или тромбоцитов). Например, обнаружение микросфероцитов может указывать на то, что в основе заболевания желчного пузыря, отмеченного в истории болезни пациента, лежит наследственный сфероцитоз. Весьма вероятно, что более детальное исследование анамнеза поможет обнаружить подобные случаи у родственников, а более внимательный осмотр области лодыжек пациента позволит убедиться в наличии следов язвенных поражений, характерных для наследственных сфероцитозов. И наоборот, гастрэктомия в анамнезе и небольшие неврологические нарушения могут привести врача к микроскопу в поисках макроовалоцитов и гиперсегментированных нейтрофилов, характерных для дефицита витамина В12 - возможной причины заболевания данного пациента даже при отсутствии анемии.

Все врачи при исследовании мазка периферической крови должны:

1. Разработать подход.
2. Знать, как приготавливается мазок крови.
3. Начать с малого увеличения в поисках типичных признаков и наиболее распространенных дефектов клеток крови (например, агрегация эритроцитов часто наблюдается при холодовой аллергии; увеличение частоты атипичных лимфоцитов является маркером хронического лимфолейкоза).
4. Проверять все три ростка кроветворения (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) одновременно. Будьте дисциплинированны, не рассеивайте внимание.
5. Быть наблюдательными.
6. Обратить внимание на общую конфигурацию, цвет, консистенцию/внутреннюю структуру, форму, размер.

Врачи-специалисты при исследовании аспирата костного мозга должны:

1. Разработать подход.
2. Знать, как приготавливается мазок костного мозга.
3. Знать, как мазок окрашивается (метиленовый синий окрашивает кислые структуры в синий цвет; эозин окрашивает основные структуры в красный).
4. Найти поле просмотра, где артефакты минимальны или отсутствуют.
5. Начать с малого увеличения (общая картина, опухолевые клетки, клеточность, жир, гетерогенность, гранулема, фиброз, лимфома, инфильтраты, мегакариоциты, соотношение миелоидных и эритроидных клеток).
6. Просмотреть достаточное количество полей.
7. Проверять все три ростка кроветворения (эритроидный, миелоидный, мегакариоцитарный) одновременно. Будьте дисциплинированны, не рассеивайте внимание.
8. Быть наблюдательными.
9. Не пытаться идентифицировать каждую клетку.
10. Просмотреть достаточное количество полей на нескольких различных стеклах.
11. Обратить внимание на дисмиелопоэз, наличие мегалобластов, на лимфоциты и плазматические клетки, аномальные клетки (например, клетки Гоше).

Более детальное обсуждение направлений исследований и анализа специальных гематологических тестов не входит в задачу данного раздела. Надеемся, что представленные здесь положения послужат моделью проведения и интерпретации результатов исследования.
Сопоставление в таблице отдельных признаков и симптомов с гематологическими заболеваниями приведено в соответствии с порядком сбора анамнеза и проведения физикального обследования. Это должно помочь практикующему врачу правильно описать, проанализировать, интегрировать и реинтегрировать специфические признаки и симптомы гематологических заболеваний.